МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ Agrobacterium tumefaciens и A. vitis в растениях винограда на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
полимеразная цепная реакция Agrobacterium vitis Agrobacterium tumefaciens методика определения виноград
Цель работы – обнаружение фрагментов дезоксирибо¬нуклеиновой кислоты (ДНК) бактерий Agrobacterium tumefaciens и Agrobacterium vitis, являющимися возбудителями бактериального рака в растениях винограда, с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (далее – ПЦР РВ) и пред¬назначена для использования в лабораториях, осуществляющих контроль качества посадочного материала винограда.
 Определение наличия возбудителей бактериального рака винограда, установленное в настоящей методике, основано на методе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР РВ), включающего одновременно амплификацию, детекцию и дифференциацию молекул ДНК Agrobacterium tumefaciens и Agrobacterium vitis в присутствии интеркалирующего красителя EvaGreen. Интенсивность флуоресценции EvaGreen увеличивается на несколько порядков при встраивании в двухцепочечную ДНК. Поэтому в ходе ПЦР при накоплении продукта амплификации сигнал флуоресценции возрастает, образуя кривую сигмоидной формы.
В качестве видоспецифичной мишени для идентификации бактерии Agrobacterium tumefaciens выбран консервативный участок гена 23S rRNA.
В качестве видоспецифичных мишеней для идентификации бактерии Agrobacterium vitis выбраны гены virD2 и virF. Ген virD2 контролирует выработку плазмид випотинового типа. Ген virF контролирует выработку плазмид октопинового и нопалинового типа. Идентификация генов virD2 и virF позволяет выявлять и дифференцировать опухолеобразующие штаммы Agrobacterium vitis.
 ПЦР в режиме реального времени состоит из следующих этапов:
–  амплификации специфической целевой последовательности с помощью ПЦР в присутствии интеркалирующего красителя EvaGreen;
–  связывания интеркалирующего красителя EvaGreen в каждом цикле амплификации;
–  генерации флуоресцентного сигнала при возбуждении во время каждого цикла;
–  контроля флуоресценции сигналов оптической системой обнаружения;
–  анализа и интерпретации данных;
–  контроля прохождения амплификации с помощью построения «кривой плавления».Возможные направления использования *
тестирование посадочного материала винограда для фитосанитарного контроля производственных ампелоценозов, выявление у саженцев латентных инфекций, мониторинг чистосортности и сортового соответствия посадочного материала,
68.37.13
Методы защиты растений от вредителей, болезней и сорняков
Виталий
Володин
Александрович
"Кандидат сельскохозяйственных наук"
"Отсутствует"
"0"
"57190215165"
"670158"
"https://www.scopus.com/authid/detail.uri?authorId=57"
"0"
РОССИЯ
Надежда
Шадура
Ивановна
"Кандидат сельскохозяйственных наук"
"Отсутствует"
"нет"
"нет"
"778059"
"0000-0002-8365-0521"
РОССИЯ
Елена
Странишевская
Павловна
"Доктор сельскохозяйственных наук"
"Профессор"
"-"
"57190218360"
"0000-0002-2840-5638"
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБУН "ВННИИВИВ "МАГАРАЧ" РАН"
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ  НАУКИ "ВСЕРОССИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВИНОГРАДАРСТВА И ВИНОДЕЛИЯ "МАГАРАЧ" РАН"
1159102130857
ВЛАДИМИР
ЛИХОВСКОЙ
ВЛАДИМИРОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения