Экспрессионный вектор pBMS10 на основе элементов LuxR-LuxI «quorum sensing» системы Aliivibrio logei
LuxR Aliivibrio logei чувство кворума Escherichia coli экспрессионный вектор
Изобретение относится к биотехнологии, биосинтезу рекомбинантных белков в клетках Escherichia coli. Разработан экспрессионный вектор pBMS10 на основе элементов LuxR-LuxI системы чувства кворума («quorum sensing», QS) морских психрофильных бактерий вида Aliivibrio logei для клонирования и экспрессии целевых генов в клетках E. coli. pBMS10 состоит из ориджина репликации pBR322, гена резистентности к канамицину, luxR2 и luxI генов A. logei под собственными промоторами, а также промоторного участка по последовательности SEQ ID NO: 1, включающего LuxR2-регулируемый промотор PBMS с полностью палиндромным lux-боксом и консенсусной последовательностю -10 и консенсусный сайт посадки рибосомы перед мультиклональным сайтом рестрикции для клонирования целевого гена под контроль промотора PBMS. Гены luxI и luxR2 кодируют N-(3-оксогексаноил)-лактон L-гомосерина (3OxoC6-HSL)–синтетазу LuxI и регуляторный белок LuxR2, соответственно. Целевой ген предполагается встраивать под контроль промотора PBMS и клонировать в клетках E. coli. Полученные таким образом экспрессионные штаммы, культивируемые в жидкой питательной среде, обладают двумя режимами индукции: автоиндукция при температуре культивирования 22 ℃ и индукция посредством экзогенного добавления 3OxoC6-HSL, при этом температура может как оставаться 22 ℃, так и повышаться вплоть до 30 ℃. Данный вектор также обладает низким базовым уровнем экспрессии в условиях отсутствия индукции, а при 37 °C индукция будет полностью отсутствовать даже в присутствии 3OxoC6-HSL. Эффективность экспрессионного вектора pBMS10 была исследована с использованием гена gfp в качестве целевого. В проведенных экспериментах количество целевого белка, синтезирующееся в клетке при максимальной индукции: 22 ℃ 20 часов, достигает 50% от общего белка в клетке.
Изобретение позволяет создавать бактериальные экспрессионные штаммы с регуляцией биосинтеза целевых белков в зависимости от температуры и концентрации АИ и позволяет достигать значительного накопления целевого белка в клетке.
Сергей
Баженов
Владимирович
старший научный сотрудник
Кандидат биологических наук
Отсутствует
S-2539-2016
57188858668
РОССИЯ
Виталий
Баган
Анатольевич
проректор по научной работе
РОССИЯ
34.15.27
Генетическая инженерия
01.06.KM
GENETICS & HEREDITY
Сергей
Баженов
Владимирович
РОССИЯ
Екатерина
Щеглова
Сергеевна
РОССИЯ
Илья
Манухов
Владимирович
РОССИЯ
Даниил
Сахаров
Игоревич
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
МФТИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "МОСКОВСКИЙ ФИЗИКО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ (НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ)"
1027739386135
ДМИТРИЙ
ЛИВАНОВ
ВИКТОРОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные автономные учреждения