Способ генотипирования патологической мышиной модели ВДКН
ПЦР-ПДРФ генотипирование мутации Cyp21 вдкн
Реферат
Способ генотипирования патологической мышиной модели ВДКН
Животные, и, в частности, мышиные модели, широко используются в научных и доклинических исследованиях различного рода. Мышиная модель С57Bl/10snslc-h-2aw18/h-2b активно используется в качестве модели врожденной дисфункции коры надпочечников, опосредованной мутациями гена CYP21A2 (Cyp21a1)  [1]. 
Линия мышей C57Bl/10SnSlc-H-2aw18 была получена в результате мейотической рекомбинации при скрещивании в 1987 году [2]. Интересующий локус H-2^aw18 представляет из себя последствия рекомбинации между геном Cyp21a1 и его псевдогеном Cyp21a2-p с делецией гена С4, 3'-части гена Cyp21a1 и 5'-части  Cyp21a2-p. Как показано, продукт такой рекомбинации - химерный ген Cyp21a1/Cyp21a2-p - располагается под промотором истинного гена и потому транскрибируется, однако из-за мутаций, пришедших из псевдогена, корректной формы белка не образуется. То есть полного отключения локуса не происходит. Такие мыши показывают частично схожий с человеческим фенотип дисфункции 21-гидроксилазы, и, более того, схожий механизм нарушения структуры интересующего гена [3].
Для определения статуса потомства мышей по интересующему гену при скрещивании гетерозиготных родителей был разработан подход на основе метода ПЦР-ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов). Были подобраны универсальные праймеры для амплификации фрагмента размером 1273 пн (амплификация трёх вариантов аллеля: дикий тип, псевдоген, мутантный вариант). При этом в случае аллеля дикого типа или псевдогена фрагмент содержит сайт посадки рестриктазы NheI, исчезающий у мутантного гена. Таким образом, обработка полученного ампликона указанной рестриктазой дает три варианта фрагментов рестрикции - неразрезанный мутантный фрагмент 1273 пн, фрагменты длинной 722 пн и 550 пн, полученные при успешной рестрикции. Данные фрагменты хорошо разделяются электрофоретическим методом в 2% агарозном геле и позволяют дискриминировать три варианта генотипа - гомозиготный дикий тип, гетерозиготный, гомозиготный мутантный аллель. 
[1] - Felix G. Riepe et all: Congenital Adrenal Hyperplasia: The Molecular Basis of 21-Hydroxylase Deficiency in H-2aw18 Mice. Endocrinology. 2005.
[2] - T Shiroishi et all: Lethal deletion of the complement component C4 and steroid 21-hydroxylase genes in the mouse H-2 class III region, caused by meiotic recombination. PNAS. 1987
[3] - S. Markmann et all: Biology of the Adrenal Gland Cortex Obviates Effective Use of Adeno-associated Virus Vectors to Treat Hereditary Adrenal Disorders. Human Gene Therapy. 2018.
Направления исследования: изучение патологического процесса при дефиците 21-ОН гидроксилазы, а также разработке препаратов для поддержания и лечения врожденной дисфункции коры надпочечников
Павел
Волчков
Юрьевич
Ведущий научный сотрудник - заведующий лабораторией
Кандидат биологических наук
Отсутствует
H-4743-2013
12792924200
166498
https://orcid.org/ 0000-0001-9794-6297
РОССИЯ
Сергей
Гаричев
Николаевич
Директор по исследованиям, разработкам и коммерциализации
РОССИЯ
34.15.23
Молекулярная генетика
34.15.27
Генетическая инженерия
34.15.65
Молекулярная патология. Молекулярная диагностика
34.23.53
Гены человека с патологическим эффектом
Ольга
Глазова
Владимировна
"Отсутствует"
"Отсутствует"
"J-1925-2014"
"56835607800"
"925470"
"0000-0001-7199-1866"
РОССИЯ
Навар
Сакр
"Отсутствует"
"Отсутствует"
"отсуствует"
"57426414800"
"0000-0003-0768-4401"
СИРИЙСКАЯ АРАБСКАЯ РЕСПУБЛИКА
Павел
Волчков
Юрьевич
"Кандидат биологических наук"
"Отсутствует"
"H-4743-2013"
"12792924200"
"166498"
"0000-0001-9794-6297"
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
МФТИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "МОСКОВСКИЙ ФИЗИКО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ (НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ)"
1027739386135
НИКОЛАЙ
КУДРЯВЦЕВ
НИКОЛАЕВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные автономные учреждения