Способ обнаружения жизнеспособных холерных вибрионов О1 серогруппы биоваров Classical и El Tor в окружающей среде с помощью бактериофага M3 методом количественной ПЦР
ХОЛЕРА VIBRIO CHOLERAE БАКТЕРИОФАГ ПЦР ДНК
Изобретение относится к биотехнологии, медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторной диагностике для обнаружения жизнеспособных вибрионов Vibrio cholerae в пробах окружающей среды. Предложен способ обнаружения жизнеспособных холерных вибрионов O1 серогруппы биоваров Classical и El Tor в окружающей среде. Проводят полимеразную цепную реакцию в реальном времени с детекцией концентрации ДНК бактериофага М3 лизирующего холерные вибрионы O1 серогруппы биоваров Classica и El Tor, с использованием праймеров и зонда. Учет результатов ПЦР проводят по геометрическому методу Ср путем регистрации на стандартной калибровочной кривой в течение заданных промежутков времени, более 2-х часов, если наблюдают накопление вирусных частиц бактериофага М3, то обнаруживают присутствие в пробах жизнеспособных холерных вибрионов O1 серогруппы биоваров Classical и El Tor, а в случае отсутствия накопления вирусных частиц подтверждают их нежизнеспособность. Для выделения ДНК бактериофага М3 предварительно перед ПЦР культивируют в 10,0 мл пептонного бульона четырех часовую пробу в объеме 0,2 мл, затем отбирают 100 мкл в эппендорф с добавлением 0,3 мл фага М3 в титре 10^2 БОЕ/мл, перемешивают, отбирают 100 мкл в эппендорф (1,5 мл), что соответствует нулевой точке (Т0), смесь размещают в термостат при 37°С на один час, затем два часа, а после выделяют стандарты ДНК от 10^8 до 10^3 БОЕ/мл комплектом реагентов. Способ позволяет осуществить быстрое и достоверное обнаружение жизнеспособных холерных вибрионов в пробах окружающей среды с помощью бактериофага М3 на основе количественной ПЦР, что позволит уйти от длительных культуральных методов исследования и приведет к ускорению выдачи результата.
Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике для обнаружения жизнеспособных вибрионов Vibrio cholerae в пробах окружающей среды.
Наталья
Гаевская
Евгеньевна
Ведущий научный сотрудник, и.о. начальника отдела
Кандидат медицинских наук
Отсутствует
AAF-5534-2020
12805528200
714821
http://orcid.org/0000-0002-0762-3628
0000-0002-0762-3628
РОССИЯ
Алексей
Носков
Кимович
Директор
РОССИЯ
34.05.17
Методы биологических исследований
01.06.QU
MICROBIOLOGY
Наталья
Гаевская
Евгеньевна
РОССИЯ
Алексей
Водопьянов
Сергеевич
РОССИЯ
Анна
Тюрина
Владимировна
РОССИЯ
Анна
Аноприенко
Олеговна
РОССИЯ
Марина
Погожова
Павловна
РОССИЯ
Сергей
Водопьянов
Олегович
РОССИЯ
Роспотребнадзор
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1047796261512
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные казенные учреждения
ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора
Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1026103278959
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные бюджетные учреждения