МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ Grapevine leafroll-associated virus 2  в растениях винограда на основе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
обратная транскрипция полимеразная цепная реакция Grapevine leafroll-associated virus 2 методика определения виноград
Цель работы – обнаружение фрагментов РНК  Grapevine leafroll-associated virus 2, вируса скручивания листьев винограда, серотип 2,  в растениях винограда с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией (далее – ОТ-ПЦР-РВ) и предназначена для использования в лабораториях, осуществляющих контроль качества посадочного материала винограда.
 Определение наличия РНК вируса скручивания листьев винограда, серотип 2, установленное в настоящей методике, основано на методе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ), которую выполняют в два этапа. На первом этапе выполняют транскрибирование РНК в комплементарную последо-вательность ДНК с помощью обратной транскрипции, на втором – синтезированную кДНК используют для постановки амплификации и обнаружения молекул кДНК Grapevine leafroll-associated virus 2.
Для гибридизационно-флуоресцентной детекции в состав реакционной смеси вводятся комплементарные продукту амплификации флуоресцентные зонды – олигонуклеотиды, содержащие флуорофоры и гасители флуорес¬ценции. На этапах элонгации цепи кДНК или отжига праймеров хромофор и гаситель пространственно разобщаются, что приводит к усилению флуорес¬центного сигнала, который фиксируется оптической системой детекти¬рующего амплификатора в режиме реального времени.
ОТ-ПЦР в режиме реального времени состоит из следующих этапов:
–  синтеза первой цепи кДНК на матрице выделенной РНК;
–  амплификации специфической целевой последовательности с помощью ПЦР в присутствии флуоресцентных зондов;
–  связывания флуоресцентных зондов в каждом цикле амплификации;
–  генерации флуоресцентного сигнала при возбуждении во время каждого цикла;
–  контроля флуоресценции сигналов оптической системой обнаружения;
–  анализа и интерпретации данных
Предназначена для фитосанитарного мониторинга виноградных насаждений, для питомниководческих хозяйств, предприятий, производящих посадочный материал.
68.37.13
Методы защиты растений от вредителей, болезней и сорняков
Виталий
Володин
Александрович
"Кандидат сельскохозяйственных наук"
"Отсутствует"
"0"
"57190215165"
"670158"
"https://www.scopus.com/authid/detail.uri?authorId=57"
"0"
РОССИЯ
Надежда
Шадура
Ивановна
"Кандидат сельскохозяйственных наук"
"Отсутствует"
"нет"
"нет"
"778059"
"0000-0002-8365-0521"
РОССИЯ
Елена
Странишевская
Павловна
"Доктор сельскохозяйственных наук"
"Профессор"
"-"
"57190218360"
"0000-0002-2840-5638"
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБУН "ВННИИВИВ "МАГАРАЧ" РАН"
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ  НАУКИ "ВСЕРОССИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВИНОГРАДАРСТВА И ВИНОДЕЛИЯ "МАГАРАЧ" РАН"
1159102130857
ВЛАДИМИР
ЛИХОВСКОЙ
ВЛАДИМИРОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения