Метрологическое обеспечение измерений концентрации копий ДНК
ЦИФРОВАЯ КАПЕЛЬНАЯ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ КОПИЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ НУКЛЕОТИДОВ СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ
Определены подходы к измерениям количества биомолекулярного объекта – копии последовательности, сформулирован подход к конкретизации последовательности, предложена величина – концентрация копий (кп/мкл), отражающая число копий последовательности в единице объема, проведен анализ метрологических характеристик современных средств измерений, обеспечивающих измерение концентрации копий последовательностей ДНК.
Разработан набор СО концентрации копий последовательностей ДНК в матрице геномной ДНК человека, подготовлен комплект документов для утверждения типа СО (Набор HeLa-ВНИИМ), произведены и испытаны две экспериментальные партии. Аттестованные характеристики СО включают концентрации копий последовательностей 10 однокопийных генов, коротких тандемных повторов и последовательности вируса папилломы человека тип 18 (HPV 18) и прослеживаются к стандартному образцу ДНК человека SRM2372a (NIST, США), а в части идентификации последовательностей - к ГЭТ 208-2019. 
Создан экспериментальный образец эталонной установки ЭОУ ДНК, обеспечивающей выполнение прослеживаемых к SI измерений концентрации копий ДНК, проведены его испытания. Выполнение измерений концентрации копий ДНК реализовано на основании использования метода цифровой капельной ПЦР. Показано, что ключевые параметры формулы измерений прослеживаются к единицам международной системы единиц SI. Разработана методика выполнения измерений концентрации копий последовательностей ДНК, обеспечившая успешной участие в ключевых сличениях Консультативного комитета по количеству вещества (метрология в химии и биологии) CCQM-K86c и пилотных сличениях CCQM-P199 и CCQM-P199b. Результаты ключевых сличений CCQM-K86c были использованы для поддержки заявки КИВ в области измерений отношения числа копий последовательностей ДНК. Заявка КИВ была одобрена и внесена в базу данных КИВ Международного бюро мер и весов 30.04.2020 г.
Предложена схема метрологической прослеживаемости измерений концентрации копий последовательностей ДНК, обеспечивающая передачу единицы концентрации копий до установок к ПЦР конечного пользователя.
Обеспечена возможность выполнения прослеживаемых к SI измерений концентрации копий ДНК и отношения числа копий без использования стандартных образцов. Получено международное признание КИВ. Проведение аттестации стандартных образцов нуклеиновых кислот по показателям концентрации копий и отношения числа копий обеспечит повышение достоверности результатов лабораторной диагностики.
Разработанный набор СО ДНК после утверждения типа будет также применяться в лабораторной и судебной медицине, в генетических исследованиях и научно-исследовательской работе в качестве калибратора и/или контрольного материала..
Максим
Вонский
Сергеевич
И.о руководителя НИО
Кандидат биологических наук
Отсутствует
В-6506-2014
22136708
9296-9396
0000-003-4063-7411
РОССИЯ
Антон
Пронин
Николаевич
И.о. генерального директора
РОССИЯ
90.29.25
Создание стандартных образцов
90.27.31
Измерения состава и физико-химических свойств веществ
90.21.31
Государственная служба стандартных справочных данных
01.04.EA
CHEMISTRY, ANALYTICAL
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Елена
Курчакова
Владимировна
Экспериментальная часть работ с выделением и очисткой нуклеиновых кислот, выполнение измерений
РОССИЯ
Максим
Вонский
Сергеевич
Научное руководство, анализ литературы, разработка концепции, постановка методик, подготовка отчета
РОССИЯ
Андрей
Рунов
Леонидович
Разработка и валидация методик, выполнения измерения, разработка стандартного образца ДНК, подготовка отчета
РОССИЯ
Владимир Иванович
Суворов
Иванович
Подготовка документации для проведения испытаний и утверждения типа разрабатываемого набора стандартных образцов
РОССИЯ
ФГУП "ВНИИМ им. Д.И.Менделеева"
Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им.Д.И.Менделеева"
1027810219007
Организация
Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии
Унитарные предприятия, основанные на праве хозяйственного ведения
ФГУП "ВНИИМ им. Д.И.Менделеева"
Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им.Д.И.Менделеева"
1027810219007
Организация
Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии
Унитарные предприятия, основанные на праве хозяйственного ведения