Способ регистрации бактериальной АТФ на основе усиления сигнала биолюминесценции светляков с помощью плазмонных наночастиц, стабилизированных детергентом
бактериальный лизис экстракция аденозинтрифосфата (АТФ) золотые наночастицы наночастицы металлов биолюминесцентная система светляков
Изобретение относится к области санитарии и медицины и может быть использовано при определении общей микробной обсемененности или содержания coli-форм в пищевых продуктах, биологических жидкостях смывах с технологического оборудования с помощью тестирования на основе биолюминесценции. Посредством добавления золотых наночастиц (ЗНЧ) можно не только усиливать сигнал биолюминесценции в следствие МУБ-эффекта, но и экстрагировать АТФ из бактериальных клеток при помощи стабилизаторов – катионного детергента бензалкония хлорида (ВАС) (1) и неинного детергента Тритона Х-100 (2). Способ получения ЗНЧ, стабилизированных детергентами, включает добавление (1) 0.65% раствора бензалкония хлорида и (2) 1.5% Тритона Х-100 к кипящему раствору тетрааурохлористой кислоты, с последующим добавлением 15 мкл 0,1 М борогидрида натрия. Экстракцию АТФ проводят при смешивании 50 мкл бактерий и 50 мкл коллоидного раствора ЗНЧ.  Далее проводят биолюминесцентный анализ путем добавления 20 мкл 0.05 мМ D-люциферина (LH2) и 20 мкл 5 мкМ люциферазы светляков Luciola mingrelica (FLuc) к 320 мкл трис-ацетатного буфера (рН 7,8), содержащего 0,05 М трис, 0,01 М MgSO4 и 0,002 М ЭДТА в растворе дистиллированной воды с рН = 7.8, после чего измеряют фоновое свечение. Затем в реакционную смесь добавляют 20 мкл клеточной суспензии и измеряют максимальную величину биолюминесцентного сигнала. Утверждается, что добавление ЗНЧ приводит к усилению сигнала биолюминесценции, а в следствие к уменьшению предела обнаружения, из-за присутствия МУБ-эффекта, а присутствие детергентов позволяет в одну реакцию проводить экстракцию АТФ из бактериальных клеток и биолюминесцентный анализ.
Мониторинг микробной чистоты в продукции пищевой, фармацевтической, косметической промышленности и в области медицины
34.05.17
Методы биологических исследований
Елизавета
Морозова
Павловна
"Отсутствует"
"Отсутствует"
РОССИЯ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ФОНД СОДЕЙСТВИЯ РАЗВИТИЮ МАЛЫХ ФОРМ ПРЕДПРИЯТИЙ В НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ СФЕРЕ"
1027739479734
СЕРГЕЙ
ПОЛЯКОВ
ГЕННАДЬЕВИЧ
Организация
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере"
Федеральные государственные бюджетные учреждения
Елизавета
Морозова
Павловна
Физическое лицо
РОССИЯ