Способ получения суспензии единичных жизнеспособных клеток из клеточных сфероидов.
Клеточный сфероид, 3D клеточная культура, суспензия клеток, ферментативная обработка
Способ подготовки трехмерных клеточных культур – клеточных сфероидов для получения суспензии жизнеспособных единичных клеток. Способ включает формирование клеточных сфероидов путем культивирования клеток в неадгезивных условиях 3-7сут в микролунках агарозных планшетов, полученных, например, с помощью 3D Petri Dish (Microtissue, США). Для снятия сфероидов с планшета при помощи механической пипетки несколько раз промывают планшет находящейся в лунках ростовой средой, и затем переносят всю среду со сфероидами в центрифужную пробирку. Контроль снятия сфероидов с планшета осуществляется при помощи микроскопа: при необходимости процедуру промывки планшета средой повторяют. После пассивного осаждения под действием силы тяжести сфероидов на дно пробирки осуществляют их диссоциацию. Для этого механической пипеткой отбирают среду над осадком сфероидов и добавляют 1 мл раствора, содержащего 500 мкл TrypLE Express и 500 мкл Accutase. Ферментацию осуществляют при +37оС на мини-рокер-шейкере с частотой перемешивания содержимого пробирок 15-20 раз/мин в течение 10 минут. Затем активность ферментов инактивируется добавлением 1 мл среды. Полученная суспензия единичных клеток может быть использована для анализа иммунофенотипа клеток на проточном цитометре.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу подготовки трехмерных клеточных культур – клеточных сфероидов для получения суспензии жизнеспособных единичных клеток и может быть использовано, в частности, для характеризации субпопуляций и получения клеточных продуктов для регенеративной медицины. Кроме того, изобретение может найти применение при разработке препаратов на основе клеточных сфероидов и их компонентов для лечения пациентов с COVID-19 (терапии и профилактика острого респираторного дистресс-синдрома, вызванного коронавирусной инфекцией).
Петр
Глыбочко
Витальевич
Ректор
Доктор медицинских наук
Академик
AAH-2508-2019
26435273000
501231
https://www.sechenov.ru/univers/all/1197/
0000-0002-5541-2251
РОССИЯ
Петр
Глыбочко
Витальевич
Ректор
РОССИЯ
76.09.41
Полимерные материалы медицинского назначения и изделия из них
02.06.CT
CELL & TISSUE ENGINEERING
Полина
Бикмулина
Юрьевна
РОССИЯ
Анастасия
Шпичка
Иосифовна
РОССИЯ
Андрей
Свистунов
Алексеевич
РОССИЯ
Денис
Бутнару
Викторович
РОССИЯ
Петр
Тимашев
Сергеевич
РОССИЯ
Настасья
Кошелева
Владимировна
РОССИЯ
Мария
Пешкова
Алексеевна
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГАОУ ВО ПЕРВЫЙ МГМУ ИМ.И.М. СЕЧЕНОВА МИНЗДРАВА РОССИИ (СЕЧЕНОВСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ)
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М. СЕЧЕНОВА МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (СЕЧЕНОВСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ)
1027739291580
ПЕТР
ГЛЫБОЧКО
ВИТАЛЬЕВИЧ
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные автономные учреждения