Способ получения рекомбинантных герпесвирусов для одновременной трансдукции и иммортализации первичных Т-лимфоцитов и НК-клеток
Рекомбинантный вирус, Herpesvirus Saimiri, первичные Т-лимфоциты, натуральные киллеры, трансдукция, иммортализация
Способ получения рекомбинантных герпесвирусов для одновременной трансдукции и иммортализации первичных Т-лимфоцитов и НК-клеток. Для проведения рекомбинации используют смешанную клеточную систему, состоящую из двух линий клеток: линии, пермиссивной к литической инфекции вирусом Herpesvirus Saimiri, и вспомогательной линии, характеризующейся высокой эффективностью трансфекции. Пермиссивную к литической инфекции культуру клеток заражают штаммом вируса Herpesvirus Saimiri HVS-C488, а другую перевиваемую линию клеток трансфицируют смесью экспрессионных плазмид, одна из которых содержит целевой участок, предназначенный для введения в геном вируса штамма Herpesvirus Saimiri HVS-C488, фланкированный последовательностями протяженностью 300-900 пар нуклеотидных оснований, гомологичных тому участку генома Herpesvirus Saimiri, в который производится введение целевого участка, а две другие экспрессионные плазмиды кодируют поверхностные гликопротеины F и H вакцинного штамма вируса кори. Совместная культивация приводит к образованию многоядерных синцитиев из клеток обеих культур, что обеспечивает прохождение рекомбинации, внедрение целевого гена в геном Herpesvirus Saimiri и выход во внеклеточную жидкость рекомбинантных герпесвирусов. Преимущество метода обусловлено использованием вспомогательной линии клеток, обеспечивающей большую эффективность трансфекции экспрессионной кассетой по сравнению с линией, пермиссивной к литической инфекции, что в итоге приводит к общему повышению эффективности наработки рекомбинантных герпесвирусов.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в исследовательских и диагностических целях для эффективного получения генетически-модифицированных иммортализованных первичных Т-лимфоцитов и НК-клеток.
Елена
Фролова
Ивановна
Руководитель научного подразделения
Кандидат биологических наук
Отсутствует
-
57200277872
РОССИЯ
Александр
Габибов
Габибович
Директор
РОССИЯ
34.15.31
Молекулярная биология вирусов
01.06.ZE
VIROLOGY
Степан
Чумаков
Петрович
исполнитель
РОССИЯ
Елена
Фролова
Ивановна
руководитель
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ИБХ РАН
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук
1037739009110
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения