Способ выявления ДНК метициллинрезистентного золотистого стафилококка с помощью петлевой изотермической амплификации
метициллинрезистентный стафилококк MRSA изотермическая амплификация LAMP молекулярная диагностика
Обнаружение ДНК метициллинрезистентного золотистого стафилококка (MRSA) осуществляется с помощью разработанных трёх наборов высокоспецифичных синтетических олигонуклеотидов (праймеры), разделённых между двумя реакционными смесями, содержащими большой фрагмент полимеразы Bst, полученной из термофильной бактерии Bacillus stearothermophilus, в специально подобранной по составу смеси. Амплификация целевых участков генома бактерий протекает в реакционном блоке детектирующего амплификатора при постоянной температуре 65 ℃ в течение 30 мин с периодическим (каждые 30 с) измерением уровня флуоресценции в образцах. Для определения видовой принадлежности возбудителя проводится амплификация в отдельной реакционной смеси с праймерами к специфичному для Staphylococcus aureus гену femB, для определения устойчивости к метициллину в другой реакционной смеси проводится амплификация с праймерами к генам mecA и mecC. Дополнительно в составе реагентов имеется урацил-ДНК-гликозилазы и дезоксирибоуридинтрифосфат, которые обеспечивают защиту реакционных смесей от возможной контаминации продуктами амплификации, содержащими уридиловые нуклеотиды. Разработанный способ выявления ДНК MRSA обладает специфичностью и чувствительностью, сопоставимыми с методами на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), совместим с оборудованием для проведения ПЦР, позволяет получать результаты по форме аналогичные результатам качественного ПЦР-анализа и сокращает продолжительность амплификации более чем в 2 раза.
Разработанный способ выявления золотистого стафилококка и определение генетических детерминант антибиотикорезистентности позволяет сократить время проведения молекулярно-биологического исследования клинического материала в клинико-диагностических лабораториях до 1-2 ч с момента поступления образца, расширяет возможности выявления устойчивых к антибиотикам штаммов за счёт анализа дополнительного гена пенициллинсвязывающего белка, делает процедуру анализа и интерпретации результатов проще, расширяет набор инструментов для осуществления эпидемиологического мониторинга госпитальных инфекций.
Кирилл
Красовитов
Владимирович
Руководитель
Отсутствует
Отсутствует
HJY-5069-2023
-
1099421
0000-0001-7237-1810
РОССИЯ
Кирилл
Красовитов
Владимирович
Руководитель
РОССИЯ
34.15.65
Молекулярная патология. Молекулярная диагностика
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Кирилл
Красовитов
Владимирович
РОССИЯ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ФОНД СОДЕЙСТВИЯ РАЗВИТИЮ МАЛЫХ ФОРМ ПРЕДПРИЯТИЙ В НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ СФЕРЕ"
1027739479734
СЕРГЕЙ
ПОЛЯКОВ
ГЕННАДЬЕВИЧ
Организация
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере"
Федеральные государственные бюджетные учреждения
Кирилл
Красовитов
Владимирович
Физическое лицо
РОССИЯ