Способ управляемой экспрессии рекомбинантных генов в клетках Escherichia coli с использованием элементов LuxR-LuxI «quorum sensing» системы психрофильных бактерий рода Aliivibrio
Экспрессионная система Вектор Quorum sensing LuxR LuxI Aliivibrio Escherichia coli Способ регуляции Температурная регуляция Аутоиндуктор
Изобретение относится к биотехнологии, биосинтезу рекомбинантных белков в клетках Escherichia coli и может быть использовано при создании штаммов-продуцентов клеточных метаболитов и белков. Разработан способ плавной регуляции уровня экспрессии целевого гена в клетках E. coli за счет использования элементов системы скоординированного ответа (“quorum sensing”, QS) первого типа психрофильных бактерий рода Aliivibrio. Экспрессия индуцируется при внесении в ростовую среду аутоиндуктора N-(3-оксогексаноил)-лактон L-гомосерина (АИ) в концентрациях от 1 нМ до 10 мкМ и снижении температуры до 20-22°С. Количество синтезированного белка в расчете на клетку напрямую зависит от концентрации АИ и от продолжительности временного интервала, в течение которого культура клеток экспрессионного штамма инкубировалась при температуре 20-22°С. При повторном повышении температуры индукция прекращается, в результате достигается точно дозированная экспрессия целевого гена. При максимальной индукции экспрессионная система позволяет получать целевой белок в количестве 20-30% от общего клеточного белка, амплитуда индукции при этом достигает 2-3 порядков по сравнению с контрольными клетками, инкубированными при 37°С без добавления индуктора.
Изобретение позволяет создавать бактериальные экспрессионные штаммы с точной регуляцией биосинтеза отдельных белков или ферментов, отвечающих за отдельные этапы биосинтеза клеточных метаболитов.
Сергей
Баженов
Владимирович
-
Кандидат биологических наук
Отсутствует
S-2539-2016
57188858668
0000-0003-1953-0311
РОССИЯ
Сергей
Баженов
Владимирович
-
РОССИЯ
34.15.05
Методы и аппаратура в молекулярной биологии
34.15.27
Генетическая инженерия
01.06.KM
GENETICS & HEREDITY
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Сергей
Баженов
Владимирович
разработал схему экспрессионной системы, сконструировал опытный образец, осуществил апробацию, развил идею применения изменения температуры для регуляции экспрессии
РОССИЯ
Екатерина
Щеглова
Сергеевна
участвовала в апробации экспрессионной системы и оптимизации протокола индукции
РОССИЯ
Илья
Манухов
Владимирович
является автором идеи использования регуляторных элементов психрофильных бактерий, участвовал в разработке схемы экспрессионной системы, выступал в роли научного консультанта
РОССИЯ
Анатолий
Михайлов
Эдуардович
участвовал в апробации экспрессионной системы и визуализации результатов экспрессии
РОССИЯ
ФОНД СОДЕЙСТВИЯ ИННОВАЦИЯМ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ФОНД СОДЕЙСТВИЯ РАЗВИТИЮ МАЛЫХ ФОРМ ПРЕДПРИЯТИЙ В НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ СФЕРЕ"
1027739479734
СЕРГЕЙ
ПОЛЯКОВ
ГЕННАДЬЕВИЧ
Организация
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере"
Федеральные государственные бюджетные учреждения
Сергей
Баженов
Владимирович
Физическое лицо
РОССИЯ