Способ криоконсервации аутологичных вагинальных лактобацилл
микробиота вагинальное отделяемое аутологичные лактобациллы криоконсервация лактобациллы
Изобретение относится к области медицины, а именно к биотехнологии, микробиологии, акушерству и гинекологии и предназначено для криоконсервации аутологичных вагинальных лактобацилл. заготовки и длительного хранения вагинальной микробиоты в виде образцов вагинального отделяемого в криозащитной среде и чистых культур отдельных видов аутологичных лактобацилл или их  консорциума, выделенных из микробиоты влагалища женщин на плотных агаризованных универсальных и селективных питательных средах. Предложен способ сохранения протективных бактерий вагинальной  микробиоты. Осуществляют отбор исходных образцов вагинальной жидкости в количестве 1-3 мл с помощью ватного (дакронового) микробиологического тампона (пипетки, аппликатора, ложки Фолькмана) с предполагаемой концентрацией общей бактериальной массы не менее 107 КОЕ/мл (ГЭ/мл) по данным культурального исследования или  ПЦР в режиме реального времени, содержащих 50 - 90% биологически активных видов Lactobacillus spp в количестве  107-9 КОЕ/мл (ГЭ/мл). Указанную бактериальную массу в соотношении 1:2-5 суспендируют в специальной комбинированной криопротективной среде, состоящей из триптиказо-соевого бульона (BBL, USA) или жидкой среды МРС (HIMEDIA, Индия)  с добавлением 10% глицерина в качестве криопротектора. В случае недостаточного количества вагинального отделяемого готовят смыв посредством введения во влагалище 2-4-х мл стерильного 0,9% физиологического раствора.  Смыв центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 минут, удаляют супернатант, осадок ресуспендируют  в 1-2 мл криозащитной  среды того же состава. Полученные образцы разливают по 1 мл в криопробирки  и замораживают при минус 80°С в условиях низкотемпературного холодильника или при  - минус 196°С в жидком азоте. Чистые культуры аутоштаммов лактобацилл, выделенные на плотных питательных средах (Лактобакагар, ФБУН «ГНЦ ПМБ», Оболенск, Россия,  колумбийский кровяной агар (Oxoid, Великобритания), смывают с помощью 0,9% физиологического раствора, готовят инокулюм с концентрацией 4 единицы по МакФарланд (1,2х109 КОЕ/мл), центрифугируют при 5000 об/мин., супенатант удаляют и осадок ресуспендируют в криозащитной среде (триптиказо-соевый бульон или жидкая среда МРС с добавлением 10% глицерина). Полученную суспензию разливают по 1 мл в криопробирки и замораживают при   минус 80°С или при - минус 196°С. Для быстрого восстановления культур  сохраненные в криопробирках образцы размораживают быстрым нагреванием на водяной бане при температуре  плюс 37°С в течение 60 - 120 секунд  при слабом встряхивании непосредственно перед проведением исследований. Способ обеспечивает сохранение титра и жизнеспособности лактобацилл при хранении в условиях низких температур.
Медицина, а именно биотехнология, микробиология, акушерство-гинекология.  Для криоконсервации аутологичных вагинальных лактобацилл. заготовки и длительного хранения вагинальной микробиоты в виде образцов вагинального отделяемого в криозащитной среде и чистых культур отдельных видов аутологичных лактобацилл или их  консорциума, выделенных из микробиоты влагалища женщин на плотных агаризованных универсальных и селективных питательных средах.
Евгений
Кира
Федорович
Генеральный директор
Доктор медицинских наук
Профессор
-
57207702141
200738
РОССИЯ
Евгений
Кира
Федорович
Генеральный директор
РОССИЯ
76.03.43
Медицинская микробиология
76.29.48
Акушерство и гинекология
03.01.TU
PHARMACOLOGY & PHARMACY
03.02.SD
OBSTETRICS & GYNECOLOGY
Татьяна
Припутневич
Валерьевна
20%
РОССИЯ
Марина
Кротова
Михайловна
15%
РОССИЯ
Игорь
Хургин
Анатольевич
15%
ИЗРАИЛЬ
Евгений
Кира
Федорович
20%
РОССИЯ
Вера
Муравьева
Васильевна
15%
РОССИЯ
Алексей
Гордеев
Борисович
15%
РОССИЯ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ФОНД СОДЕЙСТВИЯ РАЗВИТИЮ МАЛЫХ ФОРМ ПРЕДПРИЯТИЙ В НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ СФЕРЕ"
1027739479734
СЕРГЕЙ
ПОЛЯКОВ
ГЕННАДЬЕВИЧ
Организация
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере"
Федеральные государственные бюджетные учреждения
ООО "БИОМ ПЛЮС"
ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "БИОМ ПЛЮС"
1217700503536
ЕВГЕНИЙ
КИРА
ФЕДОРОВИЧ
Организация
Организации, учрежденные юридическими лицами или гражданами, или юридическими лицами и гражданами совместно
Общества с ограниченной ответственностью