Способ получения панели ДНК-зондов для определения хромосомных транслокаций, делеций и амплификаций
ДНК-зонды хромосомные болезни флуоресцентная гибридизация in situ FISH хромосомные транслокации делеции амплификации лейкоз солидные опухоли
Способ получения ДНК-зондов включает несколько этапов: 1) выбор целевых регионов генома; 2) подбор и синтез олигонуклеотидных праймеров на целевые регионы генома; 3) отработка условий ПЦР получения фрагментов целевых последовательностей; 4) получение библиотеки фрагментов ДНК и ее фрагментация; 5) лигирование адаптеров и амплификация библиотеки; 6) введение в геномную библиотеку флуоресцентной метки; 7) проверка специфичности и интенсивности ДНК-зонда в реакции FISH. Для каждого зонда были отработаны условия ПЦР, в результате которых получили одиночные, целевые фрагменты ДНК ожидаемого размера, затем была проведена локализация длинных фрагментов для оценки специфичности зонда с помощью FISH-гибридизации на препаратах метафазных хромосом с нормальным кариотипом с одновременным мечением всех целевых фрагментов с помощью ник-трансляции, после ДНК-фрагменты смешивали в эквимолярных количествах, фрагментировали до 400-1500 п.н., лигировали и проводили наработку ДНК-библиотеки с помощью ПЦР. На последнем этапе еще раз проводили проверку специфичности ДНК-библиотеки для того чтобы убедиться, что ДНК-зонд дает интенсивный сигнал в ожидаемом регионе нормальных метафазных хромосом без неспецифических сигналов в других регионах генома.
Определение хромосомных транслокаций, делеций и амплификаций в диагностике онкологических заболеваний .
76.03.39
Медицинская генетика. Медико-генетическое консультирование
Станислав
Васильев
Анатольевич
"Доктор биологических наук"
"Отсутствует"
"C-5296-2014"
"56110254200"
"205617"
"https://www.tnimc.ru/kontakty/personalii/nii-meditsinskoy-genetiki/vasilev-stanislav-anatolevich/"
"0000-0002-5301-070X"
РОССИЯ
Елена
Саженова
Александровна
"Кандидат биологических наук"
"Отсутствует"
"P-5376-2014"
"8417088300"
"138158"
"https://www.tnimc.ru/kontakty/personalii/nii-meditsinskoy-genetiki/sazhenova-elena-aleksandrovna/"
"0000-0003-3875-3932"
РОССИЯ
Екатерина
Толмачева
Николаевна
"Кандидат биологических наук"
"Отсутствует"
"P-5379-2014"
"6701777296"
"93990"
"https://www.tnimc.ru/kontakty/personalii/nii-meditsinskoy-genetiki/tolmacheva-ekaterina-nikolaevna/"
"0000-0001-6427-3276"
РОССИЯ
Андрей
Зуев
Сергеевич
"Отсутствует"
"Отсутствует"
"HIZ-9853-2022"
"-"
"1174875"
"http://www.medgenetics.ru/science/lig/personal/202355/"
"0000-0001-9474-9335"
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ТОМСКИЙ НИМЦ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "ТОМСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЦЕНТР РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК"
1027000861568
ВАДИМ
СТЕПАНОВ
АНАТОЛЬЕВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения