Способ лечения бокового амиотрофического склероза
терапия бокового амиотрофического склероза коррекция процессов экзо-эндоцитоза синаптических везикул нейровоспаления в спином мозге
Изобретение относится к области медицины, конкретно к способу терапии бокового амиотрофического склероза. Для этого в модели на мышах проводят однократную ретроорбитальную трансплантацию индуцированных микровезикул, полученных при обработке одного миллиона мезенхимных стволовых клеток жировой ткани человека цитохалазином B. Изобретение обеспечивает увеличение продолжительности жизни, облегчение моторных симптомов, коррекцию процессов экзо-эндоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях, снижение нейровоспаления в спином мозге в модели бокового амиотрофического склероза. 4 ил.


Изобретение относится к области медицины в целом, конкретно к способам терапии бокового амиотрофического склероза. Предназначено для лечения бокового амиотрофического склероза посредством трансплантации, конкретно, внутривенного введения терапевтического препарата на основе микровезикул.

Изобретение может быть использовано для увеличения продолжительности жизни, облегчения моторных симптомов, коррекции процессов экзо-эндоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях, снижения нейровоспаления в спинном мозге в модели бокового амиотрофического склероза.

Боковой амиотрофический склероз (БАС) - нейродегенеративное заболевание, характеризующееся гибелью как нижних и верхних мотонейронов и проявляющееся прогрессирующей слабостью и атрофией скелетных мышц. Гибель наступает в основном из-за осложнений, связанных с поражением дыхательной и бульбарной мускулатуры. БАС имеет низкую заболеваемость и распространенность, однако приводит к тяжелой инвалидизации с высоким уровнем летальности. Так, заболеваемость по Европе составляет в среднем 1.47-2.43 случая на 100 000 населения в год, распространенность составляет 4.06-7.89 человек на 100 000 населения (Chio et al., 2013). БАС является достаточно гетерогенным заболеванием, отмечена высокая степень вариабельности возраста начала заболевания, клинической картины, скорости прогрессирования (Bendotti et al., 2020).

В патогенез БАС вовлечены следующие механизмы: нарушение процессов аутофагии, метаболизма РНК, аксонального транспорта и стабильности цитоскелета, окислительный стресс, нейровоспаление, митохондриальная дисфункция, нарушение липидного гомеостаза, эксайтотоксичность, глиальная дисфункция (Taylor et al., 2016). Все вышеперечисленные механизмы тесно связаны между собой.

Актуальной проблемой является разработка эффективного лечения БАС. Большое количество потенциальных лекарственных средств, показавших свою эффективность на клеточных и животных моделях БАС, не смогли доказать свою эффективность в рандомизированных клинических исследованиях (Mitsumoto et al., 2014). На сегодняшний день всего лишь два препарата одобрены для лечения БАС - рилузол и эдаравон. Рилузол является антагонистом глутамата, тем самым влияя на эксайтотоксичность, один из основных механизмов патогенеза (Jaiswal, 2016). Эдаравон является антиоксидантом, нейтрализующим свободные радикалы (Pérez-González and Galano, 2011). Препарат уменьшает выраженность окислительного стресса, еще одного важного патогенетического звена БАС.

Перспективными терапевтическими подходами являются применение антисмысловых олигонуклеотидов, малых интерферирующих РНК, вирусных векторов, применение внеклеточных везикул - экзосом и микровезикул (Cappella et al., 2019; Reed and Escayg , 2021). Микровезикулы - это внеклеточные везикулы диаметром 100-1000 нм, содержащие белки, нуклеиновые кислоты и липиды. Выделяются отпочковыванием от клеточной мембраны. Внеклеточные везикулы - это мембранозные пузырьки, высвобождаемые клетками во внеклеточной пространство (Hessvik and Llorente, 2018). Микровезикулы могут быть получены из клеток искусственным образом, например путем обработки клеток цитохалазином B (Kletukhina et al., 2021).

Было обнаружено, что терапевтический эффект от применения стволовых клеток в определенной степени обусловлен внеклеточными везикулами (Cantaluppi et al., 2012). Терапия стволовыми клетками по-прежнему имеет проблемы с безопасностью применения, включая онкогенность и отторжение иммунной системой трансплантированных клеток. Бесклеточная технология на основе микровезикул лишена подобных рисков, обладает большей проницаемостью через гематоэнцефалический барьер, а также устойчивостью к разрушению различными ферментами плазмы крови.

Возможно применение внеклеточных везикул (микровезикул) в лечении различных неврологических заболеваний, в том числе нейродегенеративных (Reed S.L., Escayg A., 2021). Использование внеклеточных везикул увеличивает выживаемость мотонейрон-подобных клеток с мутацией в гене SOD1 (Bonafede et al., 2016, 2019). Показан нейропротективный и анти-апоптотический эффект применения внеклеточных везикул в mSOD1-модели БАС (Bonafede et al., 2019). Внеклеточные везикулы эффективно уменьшает количество патологических агрегатов SOD1 и митохондриальную дисфункцию у трансгенных mSOD1-мышей (Lee et al., 2016). У трансгенных mSOD1-мышей применение внеклеточных везикул улучшает моторную функцию, защищает мотонейроны и уменьшает активацию микроглии (Bonafede et al., 2020). Данные исследования говорят о перспективности применения бесклеточных технологий на основе применения внеклеточных везикул (в том числе микровезикул) в лечении БАС.

Известен «Генно-клеточный везикулярный терапевтический препарат и способ терапии рассеянного склероза посредством трансплантации генно-клеточного везикулярного терапевтического препарата» (Патент RU №2762855, МПК C12N 5/0775, A61K 48/00, A61P 25/00 - 23.12.2021, Бюл. № 36), которое относится к способу лечения рассеянного склероза. Сущностью заявленного технического решения является генно-клеточный везикулярный терапевтический препарат, состоящий из индуцированных цитохалазином Б микровезикул мезенхимных стромальных клеток из жировой ткани, предварительно генетически модифицированных рекомбинантным лентивирусом, содержащим нуклеотидную последовательность гена фактора роста нервов NGF, а также способ терапии рассеянного склероза, заключающийся в том, что проводят трансплантацию генно-клеточного везикулярного терапевтического препарата путём однократного внутривенного введения.

Недостатком данного технического решения в отношении лекарственного средства заключается в отсутствии примеров лечения бокового амиотрофического склероза (БАС), и, как следствие, возможности лечения БАС, кроме этого, в известном техническом решении терапевтический эффект связан с использованием МСК, генетически модифицированным рекомбинантным лентивирусом, содержащим нуклеотидную последовательность гена фактора роста нервов NGF, а микровезикулы используются как вектор для доставки NGF к пораженным участкам нервной системы человека.

Из исследованного уровня техники выявлено изобретение «Способ стимулирования регенерации спинного мозга при помощи везикул, полученных из мезенхимных стволовых клеток жировой ткани» (Патент RU №2739912, МПК A61K 35/28, A61P 25/00 - 29.12.2020, Бюл. № 1), включающий введение эффективного количества лекарственного средства на основе везикул, полученных из мезенхимных стволовых клеток жировой ткани.

Недостатком известного технического решения является то, что оно направлено на оценку эффектов применения микровезикул при травматическом поражении спинного мозга, однако терапевтические эффекты при боковом амиотрофическом склерозе не были оценены.

Из исследованного уровня техники выявлено изобретение по патенту EA0000031331B1 «Комбинация акампросата, баклофена и рилузола для лечения амиотрофического бокового склероза и родственного заболевания», которое имеет отношение к комбинациям и способам лечения амиотрофического бокового склероза и родственных болезней. Конкретнее, цель изобретения имеет отношение к комбинации, предназначенной для использования при лечении БАС или родственных болезней, содержащей по меньшей мере два лекарственных средства, выбранных из акампросата, баклофена и рилузола или их фармацевтически приемлемой соли. Введение может осуществляться от одного до нескольких раз в день, в течение от нескольких дней до нескольких лет и даже в течение всей жизни пациента. Постоянное или, по меньшей мере, периодически повторяющееся длительное введение будет рекомендоваться в большинстве случаев. По мнению заявителя, общими недостатками изобретения является отсутствие конкретного способа введения, концентрации препарата и схемы лечения, не показано достижение терапевтического эффекта для лечения бокового амиотрофического склероза.

Из исследованного уровня техники выявлено изобретение «Способ лечения поражения нервной системы с помощью рекомбинантной глутаматоксалоацетаттрансаминазы» (Патент RU №2712193C1, МПК A61K 38/43, A61P 25/28 - 24.01.2020, Бюл. № 3), для этого вводят рекомбинантную глутаматоксалоацетаттрансаминазу на фоне введения оксалоацетата. Рекомбинантную глутаматоксалоацетаттрансаминазу вводят в первый день в дозе 4,38 ЕД/кг, в последующие дни - в дозе 1,14 ЕД/кг. Оксалоацетат вводят перорально в дозе 100 мг в день. Введение лекарственных средств осуществляют до достижения терапевтического эффекта. Мишенью лекарственного средства является глутамат периферической крови. Глутаматоксалоацетаттрансаминаза превращает глутамат в нетоксичные кетоглутарат и аспартат. Механизм действия лекарственного средства заключается в трансаминировании глутамата периферической крови, приводящем к устранению избыточного токсического глутамата в ткани головного мозга и снижению объема поврежденной нервной ткани при ишемическом инсульте. Предлагается использование комплексной схемы, включающей подкожное введение водного раствора, содержащего рекомбинантную глутаматоксалоацетаттрансаминазу человека в качестве активного компонента на фоне приема оксалоацетата в виде биологически активной добавки перорально.

Известное техническое решение имеет недостаток, связанный с тем, что водный раствор рекомбинантной глутаматоксалоацетаттрансаминазы человека в принципе должна пройти ГЭБ, однако этот факт может быть подвергнут сомнению, в силу того, что не для всех молекул с большой молекулярной массой этот барьер может быть преодолен, что не гарантирует однозначного лечебного эффекта, т.к. невозможно рассчитать объем адресной доставки препарата.

Из исследованного уровня техники выявлено изобретение «Фармацевтическая композиция и способ терапии нейродегенеративных заболеваний, в частности бокового амиотрофического склероза» (Патент RU №2491097C1, МПК A61K 48/00, A61P 25/28, B82B 1/00 - 27.08.2013 Бюл. № 24), которое относится к медицине и касается фармацевтической композиции для терапии нейродегенеративных заболеваний, в частности бокового амиотрофического склероза, содержащей в эффективном количестве аденовирусный вектор, выполненный в виде нереплицирующейся наночастицы на основе генома аденовируса человека 5-го серотипа со вставкой гена ангиогенина человека, продуцирующей в организме человека ангиогенин и нереплицирующейся наночастицы на основе генома аденовируса человека 5-го серотипа со вставкой гена фактора роста эндотелия сосудов человека, продуцирующей в организме человека фактор роста эндотелия сосудов, при этом ген ангиогенина человека и ген фактора роста эндотелия сосудов человека клонированы в две экспрессирующих кассеты одной нереплицирующейся наночастицы на основе генома аденовируса человека 5-го серотипа.

Недостатком известного технического решения является использование аденовирусного вектора, поскольку люди вступают в контакт с аденовирусами, которые вызывают респираторные, желудочно-кишечные и глазные инфекции, большинство пациентов уже выработали нейтрализующие антитела, которые могут инактивировать вирус. Еще одним недостатком известного технического решения является режим дозирования, который предлагает введение фармацевтической композиции 1 раз в 2 недели в течение всей жизни пациента, что делает известный способ дискомфортным для пациента, так как требует регулярного и частого введения фармацевтической композиции пациенту.

Задачей заявляемого изобретения является разработка эффективного способа терапии БАС в модели на животных, основанный на применении терапевтического препарата из микровезикул, полученных из мезенхимных стволовых клеток жировой ткани путем обработки цитохалазином B.

Техническим результатом заявленного изобретения является разработка простого и эффективного способа терапии БАС в модели на животных путем введения препарата из микровезикул, полученных из мезенхимных стволовых клеток жировой ткани для увеличения продолжительности жизни, облегчения моторных симптомов, коррекции процессов экзо-эндоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях, снижения нейровоспаления в спинном мозге в модели бокового амиотрофического склероза.

Технический результат заявленного изобретения достигается за счет того, что для терапии бокового амиотрофического склероза проводят однократную ретроорбитальную трансплантацию индуцированных микровезикул, полученных при обработке одного миллиона мезенхимных стволовых клеток жировой ткани человека цитохалазином B.

Преимуществом, обеспечиваемым приведенной совокупностью признаков, является комплексный эффект микровезикулярного препарата в модели БАС, позволяющий добиться как увеличения продолжительности жизни, так и облегчения симптомов заболевания, а также коррекции нейропатологических процессов в больном организме.

Детали, признаки, а также преимущества настоящего изобретения следуют из нижеследующего описания реализации заявленного технического решения с использованием чертежей, на которых показано:

Фиг. 1 - Влияние терапевтического микровезикулярного препарата на выживаемость FUS трансгенных мышей с моделью БАС.

Фиг. 2 - Влияние микровезикулярного препарата на показатель силы хвата FUS трансгенных мышей с моделью БАС.

Фиг. 3 - Влияние микровезикулярного препарата на процессы эндоцитоза и экзоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях FUS трансгенных мышей с моделью БАС.

Фиг. 4 - Влияние микровезикулярного препарата на выраженность астроглиоза у трансгенных FUS мышей.

Осуществление изобретения.

Моделирование БАС. В качестве модели БАС была использована трансгенная линия мышей ΔFUS(1-359) с эктопной нейроспецифической экспрессией укороченного гена FUS человека на генетическом фоне CD1. FUS (fused in sarcoma) - это ДНК/РНК связывающий белок, мутации которого обнаруживаются примерно у 5% взрослых пациентов с БАС. У использованных нами трансгенных FUS мышей первые парезы возникали в возрасте около 3-4 месяцев, смерть наступала в течение нескольких недель после выявления первых симптомов.

Изготовление и анализ микровезикулярного препарата. Жировую ткань получали от здорового донора во время выполнения операций по медицинским показаниям при информированном согласии донора и в соответствии со всеми необходимыми биоэтическими принципами. Выделение стволовых клеток из жировой ткани осуществляли стандартной ферментативной обработкой 0,2 % раствором коллагеназы II. Инкубацию ткани проводили при 37°С на шейкере в режиме 120 об/мин в течение часа. Клетки трижды промывали PBS, полученный клеточный осадок ресуспендируют в среде DMEM, с добавлением 10% сыворотки крови плодов коровы, 2 мМ L-глутамина. Дальнейшее культивирование клеток осуществляют в полной среде DMEM при 37°C в 5% CO2. Методом проточной цитофлуориметрии было подтверждено, что полученные клетки экспрессируют характерные для МСК поверхностные маркеры (CD90, CD73, CD44, CD105), а также что у них отсутствует экспрессия нехарактерных для МСК маркеров. Для получения индуцированных микровезикул из мезенхимальных стволовых клеток (МСК) культуру МСК отмывали в PBS, добавляли DMEM, содержащую 10 мкг/мл цитохалазина B (Sigma-Aldrich, USA) на 30 минут (37°C, 5% CO2). После этого суспензию подвергали перемешиванию на вортексе в течение 30 секунд, а затем производили процедуру изоляции и очистки индуцированных микровезикул. При помощи метода сканирующей электронной микроскопии было установлено, что полученные микровезикулы сохраняли округлую морфологию. Методом анализ траекторий наночастиц было установлено, что средний размер микровезикул составляет 145±3,4 нм, а также выявлено, что цитохалазин B индуцировал высвобождение 1,42*1010 везикул из 1 млн. МСК.

Экспериментальные группы животных и введение микровезикулярного препарата. Было сформировано 4 экспериментальных группы мышей: 1) Мыши дикого типа, не получавшие лечение (WT) (n=22); 2) Трансгенные мыши FUS с моделью БАС, не получавшие лечение (FUS) (n=26); 3) Трансгенные мыши FUS с моделью БАС, перенесшие однократную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV1) (n=20); 4) Трансгенные мыши FUS с моделью БАС, перенесшие двухкратную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV2) (n=19). Микровезикулярный препарат вводили трансгенным мышам с моделью БАС ретрооорбитально, каждой мыши вводили объем микровезикул, полученный из 1 млн. МСК (то есть около 1,42*1010 микровезикул). Возраст мышей на момент введения микровезикул составил около 95 дней. Мышам группы FUS-MV2 первое введение микровезикул проводилось в тот же день, что и введение микровезикул мышам группы FUS-MV1. Второе введение микровезикул мышам группы FUS-MV2 было проведено через 2 недели после первого введения.

Анализ выживаемости и поведенческое тестирование. Ежедневно проводили учет выживаемости и гибели мышей. Наличие клинической симптоматики оценивали визуально путем наблюдения за мышами, при помощи хвостового теста, а также при помощи теста на силу хватки. В тесте на силу хватки (грип-тест) мышь цеплялась за решетку, присоединенную к динамометру, а затем регистрировалось усилие, необходимое для отсоединения животного от решетки.

На Фиг. 1 представлена динамика выживаемости экспериментальных групп мышей (процентное соотношение количества выживших мышей в группе по отношению к общему количеству мышей в группе) (черная линия - мыши дикого типа, не получавшие лечение (WT); красная линия - трансгенные мыши FUS с моделью БАС, не получавшие лечение (FUS); синяя линия - трансгенные мыши FUS, перенесшие однократную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV1); зеленая линия - трансгенные мыши FUS, перенесшие двукратную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV2)). Стрелками над графиком указаны моменты трансплантации микровезикулярного препарата (МВ) соответствующим группам мышей. * - достоверное отличие (p<0.05) в сравнении с группой FUS по критерию Фишера. Видно, что с 30-го дня после начала эксперимента выживаемость FUS мышей, получивших однократное введение микровезикул (группа FUS-MV1), достоверно выше в сравнении с FUS мышами, не получавшими лечение (группа FUS). У FUS мышей, получивших двукратное введение микровезикул (группа FUS-MV2), достоверно более высокая выживаемость в сравнении с группой FUS наблюдается с 50-го дня после начала эксперимента. На 50-ый день с начала эксперимента в группе мышей FUS доля выживших мышей от общего числа мышей в группе составила 24%, в группах FUS-MV1 и FUS-MV2 - 61,9% и 45%, соответственно.

Средняя продолжительность жизни FUS мышей после начала эксперимента составила 43,1±4,1 дней. У мышей группы FUS-MV1 продолжительность жизни после начала эксперимента составила 56±4,4 дней, что достоверно больше в сравнении с мышами группы FUS; у мышей группы FUS-MV2 отмечалось недостоверное увеличение данного показателя до 48,9±7,3 дней в сравнении с группой FUS.

На Фиг. 2 представлена динамика нормированного показателя силы хвата экспериментальных групп мышей (черные квадраты - мыши дикого типа, не получавшие лечение (WT); красные кружки - трансгенные мыши FUS с моделью БАС, не получавшие лечение (FUS); синие треугольники - трансгенные мыши FUS, перенесшие однократную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV1); фиолетовые треугольники - трансгенные мыши FUS, перенесшие двукратную трансплантацию микровезикулярного препарата (FUS-MV2)). Стрелками на графике указаны моменты трансплантации микровезикулярного препарата (МВ) соответствующим группам мышей. * - достоверное отличие (p<0.05) показателя у группы FUS-MV1 в сравнении с группой FUS по t-критерию Стьюдента; # - достоверное отличие (p<0.05) показателя у группы FUS-MV2 в сравнении с группой FUS по t-критерию Стьюдента. Показатель силы хвата определяется в поведенческом тесте «грип-тест» и позволяет оценить выраженность клинических двигательных нарушений у мышей. Проведенные эксперименты свидетельствуют о достоверном улучшении нормированного показателя силы хвата у мышей групп FUS-MV1 и FUS-MV2 в сравнении с FUS мышами в период с 22 по 35 день с начала эксперимента.

Исследование экзо- и эндоцитоза синаптических везикул.

Одним из важных признаков дисфункции нервно-мышечных синапсов в модели БАС является нарушение процессов экзо- эндоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях (Mukhamedyarov et al., 2019). Эксперименты проводили на препаратах диафрагмальной мышцы. Для оценки процессов экзоцитоза и эндоцитоза синаптических везикул используется флуоресцентный краситель FM 1-43 (N-(3-(triethylammonium) propyl)- 4-(4-dibutilaminostyryl pyridinium dibromide) (Invitrogen, США) в концентрации 6 мкМ. Краситель обратимо связывается с пресинаптической мембраной и во время эндоцитоза оказывается внутри вновь образующихся синаптических везикул. Процесс эндоцитоза является следствием экзоцитоза, поэтому стимуляция секреции нейромедиатора в присутствии красителя приводит к появлению светящихся пятен в нервных окончаниях, отражающих скопление окрашенных везикул, и, как следствие, увеличению флуоресценции нервных терминалей («загрузка» FM 1-43). Протокол «загрузки»: двигательный нерв нервно-мышечного препарата стимулировали в течение 3 минут с частотой 20 имп/с, краситель FM 1-43 добавляли за 1 минуту до начала стимуляции двигательного нерва и отмывали с препарата с момента окончания стимуляции. Последующая стимуляция секреции нейромедиатора в предварительно «загруженных» FM 1-43 препаратах приводит к уменьшению количества окрашенных везикул («выгрузка» FM 1-43) и снижению флуоресценции. «Выгрузку» осуществляли путем ритмической стимуляции с частотой 20 Гц в течение 15 минут. Изучение препаратов производили с использованием флуоресцентного микроскопа Olympus BX51W1, оснащенного конфокальным сканирующим диском DSU.

На Фиг. 3 показано влияние микровезикулярного препарата на процессы эндоцитоза и экзоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях FUS трансгенных мышей с моделью БАС. А - интенсивность свечения двигательных нервных окончаний экспериментальных групп мышей (мыши дикого типа, не получавшие лечение (WT); трансгенные мыши FUS с моделью БАС, не получавшие лечение (FUS); трансгенные мыши FUS, перенесшие однократную трансплантацию микровезикулярного препарата (MV1), трансгенные мыши FUS, перенесшие двукратную трансплантацию микровезикулярного препарата (MV2)) после «загрузки» красителя FM 1-43. Б - динамика снижения нормированной интенсивности свечения («выгрузки») красителя FM 1-43 при высокочастотной стимуляции (20 Гц) из предварительно загруженных (см. рис. 3А) нервных окончаний. * - достоверное отличие (p<0.05) показателя в сравнении с группой FUS по t-критерию Стьюдента; В флуоресцентных экспериментах с красителем FM 1-43 на диафрагмальной мышце было установлено, что у мышей группы FUS-MV1 происходит достоверное усиление процессов эндоцитоза («загрузка FM 1-43) в сравнении с группой FUS. Кроме того, у мышей группы FUS-MV1 динамика экзоцитоза («выгрузка FM 1-43») в процессе высокочастотной стимуляции (20 Гц), в отличие от таковой у группы FUS, достоверно не отличалась от группы WT.

Иммунофлуоресцентное исследование срезов спинного мозга. Спинной мозг мыши после перфузирования 10% забуференным формалином выделяли из позвоночного столба, фиксировали тем же раствором в течение суток при комнатной температуре, затем переводили последовательно в 20%, и далее 30% раствор сахарозы и хранили при 4°С. Криостатные поперечные срезы толщиной 7 мкм изготавливали из поясничного утолщения спинного мозга (на уровне Th8), монтировали на стекла и проводили иммуногистохимическое окрашивание.

Для окраски на маркер астроцитов - глиальный фибриллярный кислый белок (GFAP) - использовали первичные антитела mouse anti-GFAP (1:200), а также соответствующие вторичные антитела. Окрашенные срезы тканей анализировали с помощью конфокального микроскопа LSM 780 (Carl Zeiss, Германия). Подсчет количества иммунопозитивных клеток в передних рогах серого вещества спинного мозга мышей проводили с помощью программы ImageJ 12.0.1.

Нейровоспаление является важным фактором патогенеза БАС. Воспалительная реакция в нервной ткани, наблюдаемая при БАС, в первую очередь вызвана резидентными иммунными клетками ЦНС, такими как астроциты, микроглия и др. (Мухамедьяров и др., 2022). Методом иммунофлуоресцентного анализа с использованием антител к маркеру астроцитов - глиальному фибриллярному кислому белку (GFAP) мы установили, что однократная трансплантация микровезикулярного терапевтического препарата снижает выраженность астроглиоза, а значит и нейровоспаления, в срезах спинного мозга FUS трансгенных мышей (Фиг. 4). У FUS мышей, перенесших двухкратную трансплантация микровезикулярного терапевтического препарата, наблюдалось недостоверное снижение выраженность астроглиоза (Фиг. 4).

На Фиг. 4 обозначены: А - микрофотографии свечения маркера астроцитов GFAP в срезах спинного мозга у экспериментальных групп мышей (мыши дикого типа, не получавшие лечение (WT); трансгенные мыши FUS с моделью БАС, не получавшие лечение (FUS); трансгенные мыши FUS, перенесшие однократную трансплантацию микровезикулярного препарата (MV1), трансгенные мыши FUS, перенесшие двукратную трансплантацию микровезикулярного препарата (MV2)). Б - количество GFAP-позитивных клеток в экспериментальных группах мышей.

Изобретение может быть использовано в медицине и здравоохранении.

Положительные эффекты данной терапии заключаются в увеличении продолжительности жизни, облегчении моторных симптомов, коррекции процессов экзо-эндоцитоза синаптических везикул в двигательных нервных окончаниях, снижении нейровоспаления в спинном мозге в модели бокового амиотрофического склероза.
Формула изобретения
Способ терапии бокового амиотрофического склероза в модели на мышах, включающий однократную ретроорбитальную трансплантацию индуцированных микровезикул, полученных при обработке одного миллиона мезенхимных стволовых клеток жировой ткани человека цитохалазином B.

Увеличенное изображение (открывается в отдельном окне)
Физиология
Марат
Мухамедьяров
Александрович
Заведующий кафедрой
Доктор медицинских наук
Доцент
-
-
РОССИЯ
Алексей
Созинов
Станиславович
Ректор
РОССИЯ
34.39.51
Возрастная физиология
03.01.EQ
PSYCHOLOGY, CLINICAL
Марат
Мухамедьяров
Александрович
РОССИЯ
ФГБОУ ВО КАЗАНСКИЙ ГМУ МИНЗДРАВА РОССИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1021602848189
АЛЕКСЕЙ
СОЗИНОВ
СТАНИСЛАВОВИЧ
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения