ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОНСТРУКЦИЯ, КОДИРУЮЩАЯ АКТИВНУЮ ФОРМУ GLP-1, МОДИФИЦИРОВАННУЮ ПО C-КОНЦУ, ЕЁ СТАБИЛЬНАЯ ЭКСПРЕССИЯ В КЛЕТКАХ E.COLI, А ТАКЖЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЭКПРЕССИОННОГО ПРОДУКТА В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ
Инкретин GLP-1 CRAC сахарный диабет 2го типа модификация экспрессия рекомбинантный белок генетические конструкции
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению (биосинтезу) рекомбинантного пептида, состоящего из активной формы глукагоноподобного пептида-1 GLP-1, модифицированному по C-концу, в клетках E.coli за счет введения в клетки плазмиды (генетической конструкции), несущей ген, кодирующий активную форму пептида GLP-1; модифицированному по C-концу метионином, получению стабильной экспрессии активной формы GLP-1 в клетках E. coli; использование выделенной и очищенной активной формы GLP-1, модифицированному по C-концу, наработанной в клетках E. coli в качестве основы для лекарственного средства для терапии сахарного диабета второго типа.
Авторы настоящего изобретения предлагают молекулу GLP-1, по C-концу модифицированную молекулой CRAC. Данная молекула будет эффективна в качестве основы лекарственного средства для терапии сахарного диабета второго типа. При попадании в организм, молекула GLP-1-CRAC депонируется в богатых холестерином фрагментах клеточных мембран, что сказывается на улучшение её фармакокинетических показателях, при этом за счет малого размера молекулы CRAC биологическая активность молекулы не снижается.
В основе настоящего изобретения положена генетическая конструкция (плазмида), несущая ген, кодирующий GLP-1-CRAC. Генетической конструкцией могут быть трансформированы клетки E. coli штаммов серии DE3, такие как: BLR(DE3)pLysS; BLR(DE3); BL21(DE3)pLysS; BL21(DE3); AD494(DE3) pLysS и AD494(DE3). 
Рекомбинантный пептид GLP-1-CRAC, экспрессируемый любым из указанных выше трансформированных штаммов E. coli, может быть использованы в качестве активного компонента лекарственного средства. Для этого клетки, стабильно экспрессирующие GLP-1-CRAC, подвергают лизису. Затем центрифугированием выделяют фракцию, содержащую GLP-1-CRAC, которую подвергают хроматографической очистке, включающей ионообменную хроматографию и HPLC. Очищенный GLP-1-CRAC высушивается в лиофильной сушке. Высушенный препарат может быть помещен в капсулу, подходящую для хранения или воздействия желудочной кислоты. Лекарственное средство по настоящему изобретению может дополнительно содержать все необходимые компоненты и/или добавки, подходящие для использования в фармацевтических препаратах, включая ароматизаторы, красители, консерванты и т.д., при условии, что они не влияют на биологические свойства активного GLP-1-CRAC.
Техническим результатом, достигаемым при реализации данного изобретения, является повышение эффективности терапии сахарного диабета второго типа за счет использования рекомбинантного пептида GLP-1-CRAC , способного депонироваться, что приводит к улучшению фармакокинетических показателей
Екатерина
Воротеляк
Андреевна
Заведующий лабораторией
Доктор биологических наук
Член-корреспондент РАН
I-2029-2014
6506992351
0000-0001-5405-0212
РОССИЯ
Андрей
Васильев
Валентинович
Директор
РОССИЯ
34.15.23
Молекулярная генетика
34.15.27
Генетическая инженерия
01.06.KM
GENETICS & HEREDITY
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Екатерина
Воротеляк
Андреевна
РОССИЯ
Вагиф
Гасанов
Али оглы
РОССИЯ
АНДРЕЙ
ВАСИЛЬЕВ
ВАЛЕНТИНОВИЧ
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ИБР РАН
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ ИМ. Н.К. КОЛЬЦОВА РАН
1027700450800
АНДРЕЙ
ВАСИЛЬЕВ
ВАЛЕНТИНОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения