Способ выделения эндотелия микрососудов мозга крысы
Раствор Хенкса Микрососуды мозга крысы Диссоциация тканей Эндотелий
Способ включает: операции извлечения мозга крысы, удаление мозговых оболочек и крупных сосудов, диссекцию коры головного мозга в холодном растворе Хенкса и ее измельчение, диссоциацию ткани пипетированием количеством 25-30 раз, осаждение центрифугированием для отделения микрососудов от нейрональной ткани, переваривание в 0,1% растворе коллагеназы II при 37°С, осаждение и удаление фермента с последующим посевом на культуральный пластик в ростовой среде, отличающийся тем, что используют мозг крысы возрастом от 14 до 20 дней, при этом измельчают кору мозга на кусочки размером 5-7 мм, добавляют 3 миллилитра раствора Хенкса, а диссоциацию ткани осуществляют вначале пипетированием 25-30 раз пастеровской пипеткой с широким отверстием - 1,5-2 мм, после чего проводят осаждение центрифугированием, удаляют надосадок, добавляют еще 3 миллилитра раствора Хенкса и вновь пипетируют 25-30 раз пастеровской пипеткой с тонким просветом - 0,5-0,7 мм, затем центрифугируют в течение 5 минут при 1000 об/мин, удаляют надосадок и добавляют холодный 4-8°С 25% раствор бычьего сывороточного альбумина (BSA) на натрий-фосфатный буферный раствор (PBS), вновь центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин, далее надосадок пипетируют еще 25-30 раз и центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин, отбирают часть диссоциированной ткани над BSA вместе с раствором альбумина, к осадку приливают 3-4 миллилитра раствора Хенкса и центрифугируют осадок в течение 5 минут при 1000 об/мин, удаляют надосадок, добавляют к осадку 2 мл 0,1% раствора коллагеназы II на PBS и вновь пипетируют, далее пробирку с тканью помещают в роллерную установку при 37°С на 40 минут, затем после инкубации в пробирку приливают 5 миллилитров раствора Хенкса для остановки процесса переваривания, центрифугируют в течение 5 минут при 1000 об/мин, отбирают супернатант, ресуспендируют клеточную массу в ростовой среде и засевают на культуральный пластик, покрытый матригелем, при этом ростовая среда имеет следующий состав на 100 мл: DMEM/F-12 Gibco - 76 мл; телячья эмбриональная сыворотка 20% -20 мл; GlutaMAX Gibco x100 - 1 мл; глюкоза 40% - 750 мкл; гидрокортизон 1,4 мМ - 100 мкл; пируват натрия 11 мг/мл - 1 мл; антибиотик (пеницилин-5000 ед/мл:стрептомицин-5000 мкг/мл) - 1 мл. Применение изобретения обеспечивает расширение арсенала технических средств для выделения эндотелия микрососудов мозга крысы с лучшим отделением микрососудов от клеток нейрональной и глиальной природы и более высоким выходом эндотелиальных клеток. 1 табл., 2 ил.
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для выделения и культивирования эндотелия микрососудов мозга. Применение изобретения обеспечивает расширение арсенала технических средств для выделения эндотелия микрососудов мозга крысы с лучшим отделением микрососудов от клеток нейрональной и глиальной природы и более высоким выходом эндотелиальных клеток.
Марина
Капкаева
Рафаилевна
Научный сотрудник
Отсутствует
Отсутствует
AAO-1646-2020
56499412100
796528
https://istina.msu.ru/profile/Kapkaeva_Marina/
0000-0002-2833-2897
РОССИЯ
Михаил
Пирадов
Александрович
Директор
РОССИЯ
62.33.31
Культивирование клеток и тканей человека и животных
76.03.53
Патологическая физиология
02.06.CT
CELL & TISSUE ENGINEERING
03.01.RU
NEUROSCIENCES
Марина
Капкаева
Рафаилевна
Автор
РОССИЯ
Алла
Салмина
Борисовна
Автор
РОССИЯ
Дмитрий
Воронков
Николаевич
Автор
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБНУ НЦН
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НЕВРОЛОГИИ"
1027739766812
МИХАИЛ
ПИРАДОВ
АЛЕКСАНДРОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения