СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОДЕЛЬНОЙ ИММОРТАЛИЗОВАННОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩЕЙ РЕКОНСТРУИРОВАННЫЙ В-КЛЕТОЧНЫЙ РЕЦЕПТОР НЕХОДЖКИНСКИХ ЛИМФОМ ЧЕЛОВЕКА.
В-клеточный рецептор Неходжкинская лимфома иммортализованные линии клеток рекомбинантная плазмидная ДНК
Поставленная задача решается за счет получения генетической конструкции – рекомбинантной плазмидной ДНК pLV2-EF1a-scFv-Fc-MTA, кодирующей трансмембранно-заякоренный одноцепочечный BCR НХЛ человека, состоящей из плазмидного вектора pLV2-EF1a и нуклеотидной последовательности синтетического гена трансмембранно-заякоренного одноцепочечного иммуноглобулина. Плазмидный вектор содержит нуклеотидную последовательность конститутивного промотора гена фактора элонгации 1-альфа, ответственные за интеграцию гена в геном клетки фланкирующие последовательности LTRs (long terminal repeats), и нуклеотидную последовательность сигнального пептида интерлейкина-2, необходимую для секреции экспрессируемых продуктов на мембране клетки. Нуклеотидную последовательность одноцепочечного BCR НХЛ человека клонируют по сайтам рестрикции эндонуклеазы рестрикции SfiI (GGCCNNNN^ NGGCC), позволяющие в одну стадию интегрировать в плазмидный вектор pLV2-EF1a-scFv-Fc-MTA последовательности любого В-клеточного рецептора в формате одноцепочечного иммуноглобулина. Плазмидный вектор pLV2-EF1a-scFv-Fc-MTA используют для наработки лентивирусных частиц. Лентивирусными частицами трансдуцируют эукариотическую линию клеток. Трансдуцированные клетки начинают экспрессипровать поверхностно-экспонированную трансмемранно-заякоренную форму В-клеточного рецептора (BCR) патологических лимфоцитов неходжкинских лимфом (НХЛ) человека в формате одноцепочечного антитела (scFv), слитного с константным доменом иммуноглобулина человека класса IgG1 (Fc).
Изобретение относится к биотехнологии, а именно: к способу получения модельной иммортализованной линии клеток, содержащей поверхностно-экспонированную трансмемранно-заякоренную форму В-клеточного рецептора (BCR) патологических лимфоцитов неходжкинских лимфом (НХЛ) человека в формате одноцепочечного антитела (scFv), слитного с константным доменом иммуноглобулина человека класса IgG1 (Fc) и трансмемранным якорем, для разработки персонифицированных подходов к терапии лимфопролиферативных заболеваний человека.
Алексей
Белогуров
Анатольевич
Главный научный сотрудник
Доктор химических наук
Профессор
-
-
-
-
РОССИЯ
Александр
Габибов
Габибович
Директор ИБХ
РОССИЯ
34.43.45
Онкоиммунология
34.43.33
Антитела
34.15.33
Молекулярная иммунология
01.06.CO
BIOCHEMICAL RESEARCH METHODS
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Алексей
Степанов
Вячеславович
Исполнитель
РОССИЯ
Валерия
Украинская
Михайловна
Исполнитель
РОССИЯ
Алексей
Белогуров
Анатольевич
Руководитель
РОССИЯ
Александр
Габибов
Габибович
Ответственный исполнитель
РОССИЯ
Минобрнауки России
Министерство образования и науки Российской Федерации
1047796287440
Организация
Министерство образования и науки Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ИБХ РАН
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук
1037739009110
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения