Способ получения адгезивной культуры нейральных стволовых/прогениторных клеток обонятельной выстилки носа млекопитающих для лечения травм спинного мозга
Адгезивная культура нейральных стволовых/прогениторных клеток Обонятельная выстилка носа Лечение травм спинного мозга
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Заявлен способ получения адгезивной культуры нейральных стволовых/прогениторных клеток из обонятельной выстилки носа млекопитающих для лечения травм спинного мозга, включающий получение образца ткани из обонятельной выстилки носа млекопитающего с последующей промывкой и инкубированием в течение 1 ч при 37°С с 3,6 ед./мл диспазы II, затем ткань обонятельного эпителия механически отделяют от собственной пластинки в среде DMEM:F12(1:1) с антибиотиками и инкубируют с раствором 500 ед./мл коллагеназы в течение 10 мин при 37°С, инактивируют фермент средой с сывороткой, ресуспендируют, центрифугируют 2 мин при 900 g, клетки помещают на пластик и культивируют в течение 5 дней в среде DMEM:F12(1:1), содержащей 10% FBS, 2 мМ L-глутамина и антибиотики, среду заменяют каждые два дня, образованный монослой клеток обонятельного эпителия снимают с помощью 0,25% раствора трипсина, помещают на пластик, покрытый 50 мкг/мл фибронектином, культивируют 1-2 дня в нейробазальной среде, содержащей 2 мМ L-глутамина, 1% ITS, 2% В27, 100 мкг/мл стрептомицина, 100 ед./мл пенициллина, 60 мкг/мл гентамицина, 50 нг/мл bFGF, 50 нг/мл EGF, полученные клетки охарактеризовывают по маркерам нестин и βIII-тубулин. Изобретение обеспечивает получение адгезивной культуры, обогащенной нейральными стволовыми/прогениторными клетками с повышенной выживаемостью в достаточном для дальнейшей трансплантации количестве. 3 з.п. ф-лы, 14 ил., 5 пр.
Медицина
Владимир
Чехонин
Павлович
Руководитель Отдела фундаментальной и прикладной нейробиологии
Доктор медицинских наук
Академик
T-4511-2018
7004985404
РОССИЯ
Светлана
Шпорт
Вячеславовна
Генеральный директор
РОССИЯ
34.03.37
Регенерация органов и тканей
03.01.RU
NEUROSCIENCES
Владимир
Чехонин
Павлович
Автор
РОССИЯ
Анастасия
Воронова
Денисовна
Автор
РОССИЯ
Андрей
Чадин
Викторович
Автор
РОССИЯ
Марат
Валихов
Петрович
Автор
РОССИЯ
Екатерина
Карсунцева
Константиновна
Автор
РОССИЯ
Ольга
Степанова
Владиславовна
Автор
РОССИЯ
Григорий
Фурса
Андреевич
Автор
РОССИЯ
РНФ
Российский научный фонд
1137799022261
Организация
Организации, учрежденные юридическими лицами или гражданами, или юридическими лицами и гражданами совместно
Фонды
ФГБУ "НМИЦ ПН им. В.П. Сербского" Минздрава России
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр психиатрии и наркологии имени В.П. Сербского" Министерства здравоохранения Российской Федерации
1027700267737
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения