Способ получения многокомпонентных сфероидов для in vitro моделирования высоко- и умеренно дифференцированного плоскоклеточного рака кожи или органов головы и шеи человека
способ получения сфероиды модель плоскоклеточный рак
Способ получения многокомпонентных сфероидов для in vitro моделирования высоко- и умеренно дифференцированного плоскоклеточного рака кожи или органов головы и шеи человека, характеризующийся тем, что эпителиальные опухолевые клетки, в качестве которых могут быть использованы иммортализованные линии человека или клеточные культуры, выделенные из опухолевой ткани пациентов с диагностированной плоскоклеточной карциномой, стромальные клетки, в качестве которых могут быть использованы иммортализованные линии человека или клеточные культуры, выделенные из стромы слизистой оболочки органов головы и шеи или дермы, иммунные клетки, в качестве которых могут быть использованы иммортализованные линии человека или культуры мононуклеарных клеток, выделенные из периферической крови пациентов, наращивают в ростовой среде DMEM/F12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки и необязательно дополненной факторами роста FGF2 до 5 нг/мл и EGF до 50 нг/мл, после чего клеточные культуры открепляют от подложки, осаждают центрифугированием при 200g, ресуспендируют в ростовой среде, определяют их концентрацию и жизнеспособность с помощью клеточного анализатора и разводят до конечной концентрации 100 тысяч живых клеток в 1 мл среды, после чего суспензии эпителиальных и иммунных клеток соединяют в пропорции 9:1 и переносят из расчета суммарно 100 тысяч живых клеток в 1 мл среды в культуральную посуду с ультранизким адгезивным покрытием, которую помещают в СО2-инкубатор, обеспечивающий стандартные культуральные условия 37°С, 5% СО2 и насыщенную влажность, затем через 48 часов после начала культивирования удаляют одиночные клетки, не вошедшие в состав образовавшихся сфероидов, без использования центрифугирования, для чего суспензию переносят в коническую центрифужную пробирку, ожидают осаждения сфероидов под действием силы тяжести и отбирают надосадочную среду, содержащую одиночные клетки, после чего соединяют суспензии стромальных и иммунных клеток человека в соотношении 9:1 и вносят в культуральную посуду с ультранизким адгезивным покрытием, в которой находятся уже сформированные из эпителиальных опухолевых и иммунных клеток сфероиды, из расчета суммарно 100 тысяч живых клеток в 1 мл среды, и продолжают культивирование, а еще через 48 часов удаляют одиночные клетки, не вошедшие в состав образовавшихся многокомпонентных сфероидов, без использования центрифугирования, для чего суспензию переносят в коническую центрифужную пробирку, ожидают осаждения сфероидов под действием силы тяжести и отбирают надосадочную среду, содержащую одиночные клетки.
Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в области биомедицинских исследований и разработок для поиска новых подходов к лечению социально значимых заболеваний.
Андрей
Каприн
Дмитриевич
зав. кафедрой
Доктор медицинских наук
Академик
К-1445-2014
6602709853
0000-0001-8784-8415
РОССИЯ
Андрей
Костин
Александрович
первый проректор-проректор по научной работе
РОССИЯ
76.03.33
Медицинская цитология
03.01.QA
MEDICINE, RESEARCH & EXPERIMENTAL
03.02.DM
ONCOLOGY
Евгений
Казаков
Игоревич
РОССИЯ
Светлана
Фаддеева
Юрьевна
РОССИЯ
Тимур
Фатхудинов
Хайсамудинович
РОССИЯ
Андрей
Ельчанинов
Владимирович
РОССИЯ
Анна
Соболева
Геннадьевна
РОССИЯ
Сергей
Корякин
Николаевич
РОССИЯ
Ирина
Арутюнян
Владимировна
РОССИЯ
Андрей
Макаров
Витальевич
РОССИЯ
Анастасия
Лохонина
Вячеславовна
РОССИЯ
Полина
Вишнякова
Александровна
РОССИЯ
Светлана
Мелкова
Олеговна
РОССИЯ
Дарья
Артемова
Артемовна
РОССИЯ
Энар
Джуманиязова
ТУРКМЕНИЯ
Константин
Гордон
Борисович
РОССИЯ
Анатолий
Лычагин
Александрович
РОССИЯ
Вячеслав
Сабуров
Олегович
УЗБЕКИСТАН
Андрей
Каприн
Дмитриевич
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
РУДН, РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ, ФГАОУ ВО РУДН,ФГАОУ ВО "РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ"
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ"
1027739189323
ОЛЕГ
ЯСТРЕБОВ
АЛЕКСАНДРОВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные автономные учреждения