Способ конструирования минигенов млекопитающих и рекомбинантная плазмида pgC1HDR, кодирующая миниген ингибитора С1 эстеразы человека, предназначенная для получения гуманизированных по гену Serping1 мышей
С1 ингибитор эстеразы человека минигены Serping1 рекомбинантные плазмиды трансгенная мышь
Предложена рекомбинантная плазмидная ДНК pgC1HDR, включающая миниген ингибитора С1-эстеразы человека (C1-ИНГ), сигнал полиаденилирования вируса SV40 и терминатор транскрипции из гена SKIV2L человека. Миниген в 5’ и 3’-областях фланкирован геномными последовательностями локуса Serping1 мыши, при этом экспрессия минигена контролируется промотором гена Serping1 мыши. Предложен способ конструирования минигенов, заключающийся в получении плазмидной конструкции, несущей все белоккодирующие экзоны гена, фланкированные интронными последовательностями длиной от 125 до 190 п.о., обеспечивающими корректный сплайсинг минигена. Способ конструирования минигена технически заключается в клонировании нескольких фрагментов ДНК, несущих экзоны целевого гена, в промежуточные рекомбинантные плазмиды с помощью системы NEBuilder, что позволяет существенно упростить процесс конструирования минигена. Предложен способ детекции полноразмерных транскриптов минигена C1-ИНГ и генов SERPING1 человека и Serping1 мыши, и олигонуклеотидные праймеры для их осуществления. Предложен способ оценки уровней транскриптов гена SERPING1 человека и минигена С1-ИНГ человека с помощью количественной ПЦР и олигонуклеотидные праймеры для их осуществления.
Предложенная рекомбинантная плазмидная ДНК pgC1HDR может быть использована для создания генно-модифицированных мышей, гуманизированных по гену Serping1.
Оксана
Максименко
Геннадьевна
руководитель центра
Кандидат биологических наук
Отсутствует
I-1582-2013
14832993500
РОССИЯ
Павел
Георгиев
Георгиевич
директор
РОССИЯ
34.15.25
Молекулярная биология гена
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Михаил
Шепелев
Валентинович
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ИБГ РАН
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук
1027739618037
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Учреждения