Рекомбинантный продуцент омега-амидазы человека Nit2
w-амидаза человека hNit2 продуцент Escherichia coli культивирование
Изобретение относится к области биохимии и генетической инженерии (создание рекомбинантного штамма Escherichia coli продуцента -амидазы человека hNit2). Кодоновый состав гена hNIT2 в конструкте плазмиды pQE-Nit22 был оптимизирован таким образом, что соответствующий фрагмент ДНК длиной 81 п.н. был собран из синтетических олигонуклеотидов и использован для замены фрагмента BamHI-SphI в плазмиде pQE-Nit2 (патент RU 2642323). Полученную плазмиду pQE-Nit22 вводили в штамм E. coli BL21(DE3). Полученный штамм E. coli BL21(DE3, pQE-Nit22) при культивировании накапливал целевой продукт hNit2. Конечный выход целевого продукта с электрофоретической чистотой, близкой к 90% после фракционирования дробным осаждением сульфатом аммония и металлоаффинной хроматографии на Ni NTA-агарозе составил 57,2±1,9 мг из 1 л бактериальной культуры. Специфическая активность чистого белка составила 11,2±0,8 и 14,1±1,1 мкмоль×мин-1×мг-1 при использовании субстратов α-кетоглутарамата и сукцинамата, соответственно.
Биохимия, Фармацевтика, Медицина
Борис
Красников
Федорович
Ведущий аналитик отдела анализа и прогнозирования  медико-биологических рисков здоровью
Кандидат биологических наук
Отсутствует
R-2244-2019
6601907835
79315
0000-0001-9525-4385
РОССИЯ
Владимир
Слободян
Григорьевич
Помощник генерального директора
РОССИЯ
76.31.35
Фармхимия
02.06.IG
ENGINEERING, BIOMEDICAL
03.03.GM
SUBSTANCE ABUSE
Алексей
Шевелев
Борисович
Руководитель, разработчик
РОССИЯ
Евгения
Шурубор
Израиловна
Исполнитель
РОССИЯ
Мария
Смирнова
Сергеевна
Исполнитель, разработчик
РОССИЯ
Юлия
Бирюкова
Константиновна
Исполнитель, разработчик
РОССИЯ
Борис
Красников
Федорович
Руководитель работы
РОССИЯ
ФМБА РОССИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ АГЕНТСТВО
1057746023147
Организация
Федеральное медико-биологическое агентство
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБУ "ЦСП" ФМБА России
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью" Федерального медико-биологического агентства
1027700168495
Организация
Федеральное медико-биологическое агентство
Федеральные государственные бюджетные учреждения