Способ количественного мультиплексного анализа альфа-2-макроглобулина, фетуина А и сывороточного амилоида А1 как факторов воспаления в сыворотке крови с использованием MALDI-TOF масс-спектрометрии
молекулярная диагностика масс-спектрометрия сывороточный амилоид А1 фетуин А альфа-2-макроглобулин маркеры воспаления
Изобретение относится к области молекулярной диагностики, а именно к разработке метода молекулярной диагностики синдрома системной воспалительной реакции (ССВР, systemic inflammatory response syndrome, SIRS), включая сепсис, с помощью количественного определения альфа-2-макроглобулина, фетуина А и сывороточного амилоида А1 в сыворотке крови человека с применением технологии MALDI-TOF масс-спектрометрии.
Способ количественного мультиплексного анализа альфа-2-макроглобулина, фетуина А и сывороточного амилоида А1 как факторов воспаления в сыворотке крови с использованием MALDI-TOF масс-спектрометрии, в ходе которого сыворотку крови разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1/25, а трипсин разводят до концентрации 50 мкг/мл в 50 мМ NH4HCO3, после чего полученные растворы смешивают в равном соотношении и инкубируют при 37°С в течение 15 минут для измерения уровней α2-МГ и в течение 120–180 минут для измерения уровней фетуина А и SAА1, далее реакцию трипсинолиза останавливают внесением равного объема 2% трифторуксусной кислоты до объемной концентрации 1%, затем в образцы вносят соответствующие изотопно-меченые стандарты в известной концентрации, после чего полученный образец наносят на мишень масс-спектрометра с использованием α-циано-4-гидроксикоричной кислоты в качестве матрицы, после чего получают масс-спектры в режиме регистрации положительных ионов при установке мощности лазерного излучения на уровне минимального порогового значения, достаточного для десорбции-ионизации образца, причем масс-спектры получают путем суммирования пяти серий по 1000 импульсов лазера для каждой серии, при этом для альфа-2-макроглобулина в качестве изотопно-меченого стандарта используют пептид VGFYESDVMGR, для фетуина А — HTFMGVVSLGSPSGEVSHPR, а для сывороточного амилоида А1 — FFGHGAEDSLADQAANEWGR, в качестве изотопной метки используется стабильный изотоп кислорода 18О.
Технический результат состоит в обеспечении возможности эффективного количественного мультиплексного анализа альфа-2-макроглобулина, фетуина А и сывороточного амилоида А1 как факторов воспаления в сыворотке крови с использованием MALDI-TOF масс-спектрометрии.
Обеспечении возможности эффективного количественного мультиплексного анализа альфа-2-макроглобулина, фетуина А и сывороточного амилоида А1 как факторов воспаления в сыворотке крови с использованием MALDI-TOF масс-спектрометрии
Андрей
Васин
Владимирович
Директор Института биомедицинских систем и биотехнологий
Доктор биологических наук
Доцент
H-9036-2017
7005419335
0000-0002-1391-7139
РОССИЯ
Юрий
Клочков
Сергеевич
Проректор по научно-организационной деятельности
РОССИЯ
34.15.31
Молекулярная биология вирусов
34.15.33
Молекулярная иммунология
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Яна
Забродская
Александровна
РОССИЯ
Андрей
Васин
Владимирович
РОССИЯ
Сергей
Клотченко
Анатольевич
РОССИЯ
Алексей
Ложков
Александрович
РОССИЯ
Константин
Семенов
Константинович
РОССИЯ
Александр
Тараскин
Сергеевич
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГАОУ ВО "СПбПУ"
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого»
1027802505279
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные автономные учреждения