Способ идентификации бактерий Bacillus thuringiensis
масс-спектрометрия белков гель-электрофорез лизис идентификация штаммов бактерий Bacillus thuringiensis
Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к способам идентификации подвидов, серотипов, а также вирулентных и авирулентных вариантов штаммов и определения спектра действия бактерии Bacillus thuringiensis. Способ предусматривает лизис культуры Bacillus thuringiensis кипячением в 4-кратном объеме буферного раствора, содержащего 50 мМ ТрисНСl, 2% бетамеркаптоэтанол, 2% глицерин и 2% додецил - сульфат натрия с получением тотального белкового лизата. Полученный лизат подвергают гель-электрофорезу на полиакриламидном геле, гель подвергают окрашиванию кумасси бриллиантовым синим и отмывают. При этом идентификацию проводят по характеру распределения полос на геле, используя для сопоставления не менее от одной полосы в зоне 80-160 кДа и не менее двух полос в зоне 15-40 кДа и при необходимости дополнительно не менее двух минорных полос в зоне 40-80 кДа. Дополнительно гель-электофорез может быть дополнен масс-спектрометрией белков, для чего полученные при гель-электрофорезе полосы выделяют из геля, подвергают обработке трипсином и разделяют при помощи обращеннофазной жидкостной хроматографии на фракции, состав каждой из которых идентифицируют при помощи тандемной времяпролетной или электроспрейной масс-спектрометрии. Изобретение позволяет повысить точность идентификации бактерий вида Bacillus thuringiensis до штамма.
Агробиотехнологии, для идентификации подвидов, серотипов, а также вирулентных и авирулентных вариантов штаммов и определения спектра действия бактерии Bacillus thuringiensis.
Антон
Нижников
Александрович
заведующий лабораторией
Доктор биологических наук
Старший научный сотрудник
H-9983-2013
24280488500
616140
0000-0002-8338-3494
РОССИЯ
Николай
Проворов
Александрович
директор
РОССИЯ
62.65.11
Биотехнология в растениеводстве
04.01.AH
AGRICULTURE, MULTIDISCIPLINARY
Кирилл
Антонец
Сергеевич
35% - проработка концепции, участие в выполнении всех экспериментов,  подготовка текста заявки
РОССИЯ
Светлана
Гришечкина
Денисовна
10% - культивирование штаммов
РОССИЯ
Юрий
Маловичко
Викторович
20% - выполнение экспериментов по получению белковых лизатов и их разделению при помощи гель-электрофореза
РОССИЯ
Антон
Нижников
Александрович
15% - координация работы, анализ литературы
РОССИЯ
Валентина
Ермолова
Павловна
10% - культивирование штаммов
РОССИЯ
Игорь
Тихонович
Анатольевич
10% - анализ литературы
РОССИЯ
ФГБНУ ВНИИСХМ
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии"
1027809002979
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения