Способ молекулярного типирования типичных (О1) и атипичных (RO) нетоксигенных штаммов V. cholerae El Tor с помощью ПЦР в режиме реального времени
МОЛЕКУЛЯРНОЕ ТИПИРОВАНИЕ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ АТИПИЧНЫЕ НЕТОКСИГЕННЫЕ ШТАММЫ ТИПИЧНЫЕ НЕТОКСИГЕННЫЕ ШТАММЫ ХОЛЕРНЫЕ ВИБРИОНЫ VIBRIO CHOLERAE
Данное изобретение относится к микробиологии и генетической инженерии и может быть использовано в лабораторной диагностике при проведении мониторинга за холерой, планировании противоэпидемических мероприятий и исследований, связанных с изучением особенностей биологии возбудителя. Описан способ молекулярного типирования типичных (O1) и атипичных (RО) нетоксигенных штаммов Vibrio cholerae El Tor с помощью ПЦР в режиме реального времени, включающий выделение ДНК из исследуемого штамма, проведение ПЦР со специфическими праймерами и последующим учетом реакции амплификации. Амплификацию исследуемой ДНК проводят одновременно с пятью парами праймеров, при этом в инкубационную смесь вносят 0,5 мкл интеркалирующего красителя 50Х SYBR Green I для выявления продуктов амплификации по динамике изменения показателя флюоресценции по каналу FAM амплификатора. Учет результатов осуществляют по геометрическому методу, путем регистрации Дельта Ср, отраженному на экране монитора, а именно: при наличии целевого продукта генов ACD-rtxA, tcpA, vce, vspD, vgrG3 формируется амплификон с низким показателем Ср, в пределах (8-15) циклов, подтверждая присутствие тестируемого гена типичных O1 и атипичных (RО) нетоксигенных штаммов V. cholerae O1 El Tor, в случае отсутствия специфической мишени реакция с парами праймеров образует амплификон с более высоким показателем Ср, в пределах (21-29) циклов, подтверждая отсутствие тестируемого гена. Технический результат заключается в создании простого быстрого и достоверного способа молекулярного типирования штаммов с помощью ПЦР с последующим электрофоретическим учетом результатов типичных и атипичных (RО) нетоксигенных штаммов V. cholerae El Tor.
Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике при проведении мониторинга за холерой, планировании противоэпидемических мероприятий и исследований, связанных с изучением особенностей биологии возбудителя.
Сергей
Водопьянов
Олегович
Главный научный сотрудник
Доктор медицинских наук
Отсутствует
-
6701686549
289536
https://orcid.org/0000-0003-4336-0439
0000-0003-4336-0439
РОССИЯ
Алексей
Носков
Кимович
Директор
РОССИЯ
34.15.27
Генетическая инженерия
34.15.25
Молекулярная биология гена
34.27.05
Методы и аппаратура в микробиологии
34.27.23
Экология микроорганизмов
34.27.59
Эпидемиология микроорганизмов
01.06.QU
MICROBIOLOGY
03.03.NN
INFECTIOUS DISEASES
Сергей
Водопьянов
Олегович
РОССИЯ
Мария
Ежова
Ивановна
РОССИЯ
Владимир
Кругликов
Дмитриевич
РОССИЯ
Дарья
Левченко
Александровна
РОССИЯ
Игорь
Олейников
Павлович
РОССИЯ
Алексей
Водопьянов
Сергеевич
РОССИЯ
Роспотребнадзор
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1047796261512
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные казенные учреждения
ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора
Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1026103278959
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные бюджетные учреждения