Способ выращивания костного регенерата между отломками травмированной трубчатой кости кролика с применением ин виво биореактора в эксперименте
костный регенерат трубчатая кость большеберцовая кость фактор роста морфогенетический белок биореактор клеточные технологии регенеративная медицина
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для выращивания костного регенерата между отломками травмированной трубчатой кости кролика. Подготавливают операционное поле и выполняют хирургический доступ к диафизу трубчатой кости животного. Проводят сегментарную резекцию диафиза нижней трети большеберцовой кости длиной 3 см. Снимают с краев опилов кости надкостницу шириной 0,5 см. Надевают на концы полой трубки ин виво биореактора воронки в виде усеченного полого конуса из биоинертного натурального латекса. В отверстие трубки ин виво биореактора вставляют сначала опил отломка дистальной части большеберцовой кости. Опил отломка проксимальной части большеберцовой кости с прилеганием манжет воронки к наружным поверхностям опилов большеберцовой кости. В полости ин виво биореактора дополнительно размещают трубки из силиконовой резины, свободные концы которых выводят через проколы на поверхность кожного покрова. Свободные концы трубок ин виво биореактора закрепляют через металлический штуцер к разъему типа "Луер-Лок" с защитным колпачком. Выполняют стабилизацию костных отломков с помощью аппарата внешней фиксации для чрескостного остеосинтеза. Ушивают операционную рану с наложением асептической повязки. Укладывают животное на здоровый бок, переводят выведенные на поверхность кожного покрова животного трубки из силиконовой резины с металлическим штекером соединительного разъема для шприца типа "Луер-Лок" с защитным колпачком в вертикальное положение. Открывают защитный колпачок и через силиконовую трубку вводят жидкую композицию. Заполняют ин виво биореактор с контролем уровня жидкости композиции в другой трубке. В качестве жидкой композиции используют питательную среду для клеточных культур ДМЕМ DMEM с глутамином, содержащую 1 г/л глюкозы, с пируватом Na с добавлением фактора роста эндотелия сосудов-А человека, изоформа 165, рекомбинантный rhVEGF-A165 в количестве 0,25 нг на 1 мл питательной среды. Производят замену жидкой композиции два раза в сутки в первые 2 суток от момента начала операции. После слива раствора жидкой композиции ин виво биореактор промывают однократно стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. 1 раз в сутки в течение 8 дней пространство ин виво биореактора заполняют питательной средой для клеточных культур ДМЕМ с глутамином, содержащей 1 г/л глюкозы, пируват Na с добавлением 10% лизата кроличьих тромбоцитов, с добавлением фактора роста эндотелия сосудов-А человека, изоформа 165, рекомбинантного rhVEGF-A165 в количестве 0,25 нг на 1 мл среды. Далее 1 раз в сутки в течение 15 дней пространство ин виво биореактора заполняют питательной средой для клеточных культур F12 с добавлением ВМР-7 рекомбинантного человеческого морфогенетического белка-7 rhBMP-7 в концентрации 25 нанограммов на миллилитр питательной среды по четным дням, а также заполняют питательной средой для культур клеток F12 с добавлением ВМР-2 рекомбинантного человеческого морфогенетического белка-2 rhBMP-2 в концентрации 25 нанограммов на миллилитр по нечетным дням. Через 25-30 дней выполняют хирургическое извлечение ин виво биореактора с доступом через шов от предшествующей операции по установке биореактора, обнажают со стороны трубок из силиконовой резины стенку ин виво биореактора, отсекают трубки из силиконовой резины у места вхождения трубки в стенку полой трубки ин виво биореактора, удаляют металлический штуцер и с обоих концов полой трубки ин виво биореактора удаляют воронки. Кусачками рассекают стенки воронки по всей длине, кусачками раскалывают стенку полой трубы ин виво биореактора вдоль и после удаления осколков поворачивают полую трубку ин виво биореактора вокруг своей оси и кусачками раскалывают вдоль, образованные две части трубки ротационными движениями извлекают из тканей. Удаляют трубки из силиконовой резины вытягиванием. Рану послойно ушивают. Аппарат Илизарова демонтируют через 140-150 дней после минерализации и ремоделирования костного регенерата. Способ обеспечивает восстановление дефекта кости без необходимости вторичной операции по пересадке созданного искусственным путем костного трансплантата и прорастание в него сосудов и нервов за счет надежного снабжения костного регенерата биологически активными и питательными веществами и обеспечения ортотопической сборки костей.
Способ выращивания костного регенерата между отломками травмированной трубчатой кости кролика с применением ин виво биореактора в эксперименте и может быть использовано при хирургическом лечении пациентов в условиях травматолого-ортопедических, хирургических и других стационаров.
Алексей
Ковалев
Вячеславович
Заведующий лабораторией соединительной ткани с группой клинической генетики ФГБУ НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова МЗ РФ
Кандидат медицинских наук
Отсутствует
AAC-6827-2019
57197371616
117622
https://orcid.org/0000-0003-1277-5228
0000-0003-1277-5228
РОССИЯ
Александр
Губин
Вадимович
Директор ФГБУ «НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова» Минздрава России
РОССИЯ
62.61.51
Биоматериалы для имплантации и раневых покрытий
76.29.41
Ортопедия и травматология. Медицинские аспекты протезирования
76.03.33
Медицинская цитология
03.01.QA
MEDICINE, RESEARCH & EXPERIMENTAL
Алексей
Ковалев
Вячеславович
РОССИЯ
МИНЗДРАВ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1127746460896
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н.Приорова" Минздрава России
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии им. Н.Н.Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
1037739007998
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения