Рекомбинантная плазмидная ДНК pSMT3_HCRG21, кодирующая гибридный белок SMT3-HCRG21, штамм бактерий Escherichia coli BL21(DE3)/pSMT3 - продуцент анальгетического пептида HCRG21, и способ получения рекомбинантного анальгетического пептида HCRG21
способ получения пептида анальгетический пептид гибридный белок штамм бактерий рекомбинантная плазмидная ДНК
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению анальгетических пептидов в прокариотах и может быть использовано в медицине. Пептид HCRG21 получают путем трансформации компетентных клеток Escherichia coli BL21(DE3) рекомбинантной плазмидной ДНК pSMT3_HCRG21, обеспечивающей синтез гибридного белка SMT3_HCRG21, содержащего целевой пептид, в клетках Escherichia coli. Указанная плазмидная ДНК содержит фрагменты ДНК плазмид pET 23a(+) и pET 28a(+), промотор и терминатор траснкрипции Т7-РНК-полимеразы, синтетическую нуклеотидную последовательность, кодирующую гибридный белок SMT3-HCRG21, ген устойчивости к антибиотику канамицину, участок инициации репликации бактериофага f1 (Оri f1). Настоящее изобретение раскрывает штамм Escherichia coli BL21(DE3)/ pSMT3_HCRG21, продуцирующий указанный гибридный белок. Настоящее изобретение также раскрывает способ получения указанного рекомбинантного пептида HCRG21, предусматривающий культивирование указанного штамма Escherichia coli BL21(DE3)/pSMT3_HCRG21. Технический результат - образование HCRG21 с последовательностью SEQ ID NO: 1, выход которого в 2 раза превышает выход по способу-прототипу, и достигает 10,2 мг/литр культуры при чистоте препарата 97%, который имеет замкнутые дисульфидные связи по данным масс-спектрометрии и способен ингибировать капсаицин-вызванные токи через ионный канал TRPV1 на модельных клетках. Кроме того, использование в качестве белка партнера фрагмента N-концевой последовательности SMT3, которая распознается и выщепляется специфической протеазой дрожжей Ulp1, позволяет избежать использования в схеме синтеза ядовитого бромциана, что расширяет круг задач, где можно применять полученную таким способом субстанцию.
биотехнология
Елена
Лейченко
Владимировна
ЗАВЕДУЮЩИЙ ЛАБОРАТОРИЕЙ
Кандидат химических наук
Отсутствует
G-3154-2017
15840143400
0000-0002-2360-1365
РОССИЯ
Павел
Дмитренок П. С.
Сергеевич
Директор
РОССИЯ
62.13.39
Биотехнологическое получение пептидов, сахарозаменителей
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Василий
Степаненко
Николаевич
14,3%
РОССИЯ
Елена
Лейченко
Владимировна
14,3%
РОССИЯ
Анна
Подволоцкая
Борисовна
14,3%
РОССИЯ
Сергей
Козлов
Александрович
14,3%
РОССИЯ
Михаил
Терешин
Николаевич
14,3%
РОССИЯ
Эмма
Козловская
Павловна
14,3%
РОССИЯ
Людмила
Текутьева
Александровна
14,3%
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ТИБОХ ДВО РАН
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук
1022502129540
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения