СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОМНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ И ЧИСЛА КОПИЙ Т-ДНК В ГЕНОМЕ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ РАСТЕНИЙ С ПОМОЩЬЮ CAS9-ЦЕЛЕВОГО НАНОПОРОВОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ
трансгенные растения рибонуклеопротеидные комплексы Cas9/гРНК CAS9-целевое нанопоровое секвенирование генотипирование растений трансгенная ДНК
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Представлен способ определения геномной локализации и числа копий Т-ДНК в геноме трансформированных растений с помощью Cas9-целевого нанопорового секвенирования. Способ включает в себя следующие этапы: выделение высокомолекулярной фракции ДНК индивидуальных трансгенных растений (HMW DNA), пулирование ДНК индивидуальных трансгенных растений; подбор гРНК, специфичных для области Т-ДНК, и синтез гРНК in vitro на молекуле двуцепочечной ДНК-матрицы, сборка рибонуклеопротеидных комплексов Cas9/гРНК, Cas9-целевое нанопоровое секвенирование, идентификация мест вставки Т-ДНК у пула растений при помощи подхода NanoCasTE, подбор специфичных праймеров для каждой инсерции Т-ДНК на участки, фланкирующие место вставки, генотипирование индивидуальных растений. Изобретение позволяет получить новый способ определения места и числа копий Т-ДНК в геноме растений и создать маркеры для генотипирования трансформированных растений с помощью Cas9-целевого нанопорового секвенирования. 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии растений, а именно к способу определения геномной локализации и числа копий Трансгенной-ДНК (Т-ДНК) в геноме трансформированных растений.
Геннадий
Карлов
Ильич
Директор
Доктор биологических наук
Академик
F-7403-2013
57214069433
97075
РОССИЯ
Геннадий
Карлов
Ильич
Директор
РОССИЯ
68.35.03
Селекция и семеноводство сельскохозяйственных культур
04.01.AH
AGRICULTURE, MULTIDISCIPLINARY
Павел
Меркулов
Юрьевич
РОССИЯ
Александр
Соловьев
Александрович
РОССИЯ
Геннадий
Карлов
Ильич
РОССИЯ
Захар
Константинов
Сергеевич
РОССИЯ
Михаил
Дивашук
Георгиевич
РОССИЯ
Илья
Киров
Владимирович
РОССИЯ
Максим
Дудников
Васильевич
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБНУ ВНИИСБ
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной   биотехнологии»
1037739342123
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения