Определение степени диссоциации апобелка A-I и способ прогнозирования структурных и функциональных свойств липопротеинов высокой плотности плазмы крови человека, контролирующих основной путь выхода холестерина из макрофагов
БЕЛОК-БЕЛКОВЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БЕЛОК-ЛИПИДНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ДИСЛИПИДЕМИЯ АТЕРОСКЛЕРОЗ ОБРАТНЫЙ ТРАНСПОРТ ХОЛЕСТЕРИНА АПОБЕЛОК
Область применения: Липопротеомика, метаболомика, клеточная биология атерогенеза, структурная биология, молекулярная кардиология.
Технический результат заявленного изобретения заключается в выявлении новых структурно-функциональных свойств частиц липопротеинов высокой плотности плазмы крови человека, детерминирующих их атеропротективные свойства.
Для решения задачи у пациентов-мужчин без атеросклероза была взята плазма крови и проведена денатурация хаотропным агентом мочевиной препаратов ЛВП, полученных преципитацией апоВ-содержащих липопротеинов полиэтиленгликолем. Происходящая при денатурации пЛВП диссоциация апоA-I была измерена по накоплению преβ-апоA-I при разделении пЛВП электрофорезом в геле агарозы с последующей иммунодетекцией апобелка в реплике геля. Влияние индукция диссоциации апоA-I мочевиной на функциональные свойства пЛВП выявлено измерением ABCA1-опосредованного эффлюкса флуоресцентного аналога холестерина из линии макрофагов мыши RAW 264.7 на пЛВП пациентов как акцептор холестерина. Степень диссоциации апоA-I как параметр D рассчитана как прирост доли преβ-апоA-I относительно нативных пЛВП по формуле: D = (〖преβ〗_4.25^' – 〖преβ〗_0^')/(1 – 〖преβ〗_0^'), где преβ_4.25^' и 〖преβ〗_0^' - значения долей preβ при концентрации мочевины 4,25 М и 0 М соответственно. Для описания диссоциации использована модель распределения апобелка между фосфолипидной фазой ЛВП и водной фазой в соответствии с относительными размерами фаз. Положительное отклонение от линейной зависимости увеличения степени диссоциации при снижении содержания фосфолипидов ЛВП свидетельствует об относительном увеличении содержания небольших ЛВП при снижении содержания ХС-ЛВП плазмы. Диссоциировавший апоA-I определяет прирост ABCA1-опосредованного эффлюкса на препараты ЛВП пациентов как акцептор холестерина. Прогнозирование структурных и функциональных свойств ЛВП, контролирующих эффлюкс холестерина из макрофага сосудистой стенки, основано на совместном использовании параметра D и содержания апоA-I в ЛВП и наличия значимой положительной корреляции между ABCA1-опосредованным эффлюксом и содержанием апоA-I, диссоциировавшего от ЛВП. Это позволяет сравнить эффективность донирования свободного от липидов апоA-I частицами ЛВП разных пациентов с различным содержанием фракций ЛВП2 и ЛВП3 для последующего участия в реакции ABCA1-опосредованного эффлюкса холестерина из макрофага. Атеропротективный эффект небольших ЛВП3 определяется их увеличенным донированием свободного от липида апоA-I относительно более крупных ЛВП2.
Для собственных нужд НМИЦ ТПМ, а также использования в иных медицинских учреждениях
Александр
Дергунов
Дмитриевич
Руководитель лаборатории
Доктор биологических наук
Отсутствует
F-7263-2011
7004123856
РОССИЯ
Надежда
Учеваткина
Владимировна
руководитель отдела
РОССИЯ
76.29.30
Кардиология и ангиология
76.03.39
Медицинская генетика. Медико-генетическое консультирование
03.01.QA
MEDICINE, RESEARCH & EXPERIMENTAL
01.06.CO
BIOCHEMICAL RESEARCH METHODS
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Александр
Дергунов
Дмитриевич
Разработка идеи изобретения и основы проведенных экспериментов, провел анализ полученных данных и формулировка формулу изобретения, связь содержания транскриптов вовлеченных в метаболизм ЛВП и атерогенез генов мононуклеарных клеток крови с холестерин-акцептирующей способностью ЛВП и их структурной стабильностью в реакции выхода холестерина из макрофагов
РОССИЯ
Дмитрий
Литвинов
Юрьевич
Разрабатывал протокол загрузки макрофагов холестерином, ковалентно связанным с флуоресцентной молекулой 4,4-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene, без использования циклодекстрина, оптимизировал протокол проведения эффлюкса холестерина, участвовал в проведении экспериментов по денатурации липопротеинов высокой плотности мочевиной, связь содержания транскриптов вовлеченных в метаболизм ЛВП и атерогенез генов мононуклеарных клеток крови с холестерин-акцептирующей способностью ЛВП и их структурной стабильностью в реакции выхода холестерина из макрофагов
РОССИЯ
МИНЗДРАВ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1127746460896
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБУ "НМИЦ ТПМ" МИНЗДРАВА РОССИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "НАЦИОНАЛЬНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1027739172240
Организация
Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения