Способ разделения водной и органической фаз при очистке раствора ДНК фенол-хлороформным методом
ДНК ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК
Экстракция смесью фенол-хлороформа является одним из основных этапов выделения и очистки ДНК. Для этого лизат клеток или раствор ДНК смешивают с равным объемом фенол-хлороформа (в соотношении 1:1) и перемешивают до образования эмульсии. В ходе этого процесса белки денатурируют и частично растворяются в фенол-хлороформе при этом полярные молекулы ДНК, имеющие отрицательный заряд, остаются растворенными в водном растворе. Для более быстрого разделения водной и органической фаз раствор центрифугируют. В результате в нижнюю органическую фазу (фенол-хлороформ) попадают частично белки, липиды и жирные кислоты, в промежуточную интерфазу на границе водной и органической фаз, белки, и в водную фазу нуклеиновые кислоты. Далее водную фазу отбирают и нуклеиновые кислоты осаждают этанолом или изопропанолом. Однако отбор водной фазы требует определенного опыта, и полностью собрать водную фазу практически невозможно, так как в процессе отбора легко захватить интерфазу и/или фенол. Контаминация нуклеиновых кислот фенолом и/или белками из интерфазы снижает качество ДНК и может привести к ингибированию последующих реакций. В свою очередь если проявить излишнюю осторожность и не полностью отобрать водную фазу, то снижается выход ДНК, что крайне нежелательно особенно если количество исходного материала ограничено. 
Задачей заявляемого изобретения является стабильное разделение водной и органической фаз в процессе выделения ДНК фенол-хлороформным методом.
Указанный технический результат достигается тем, что при разделении водной и органической фаз в процессе очистки ДНК смесью фенол-хлороформа, в пробирку добавляют примерно 50-100 мкл геля содержащего 85% полидиметилсилоксана (CAS 63148-62-9), 10% аморфного диоксида кремния (CAS 7631-86-9) и 5% диметилсилоксана с концевыми гидроксильными группами (CAS 70131-67-8). В процессе центрифугирования гель формирует плотный слой между органической фазой, интерфазой и водной фазами. В результате чего можно легко и полностью отобрать водную фазу, содержащую нуклеиновые кислоты, не захватывая органическую фазу и интерфазу. Техническим результатом изобретения является обеспечение стабильного разделения водной и органической фаз при очистке ДНК фенол-хлороформным методом, что позволяет увеличить выход и снизить вероятность контаминации очищаемой ДНК фенолом и белками.
Разработанный способ разделения водной и органической фаз может быть использован при выделении нуклеиновых кислот фенол-хлороформным методом. Данный подход позволяет увеличить выход и снизить вероятность контаминации очищаемой ДНК фенолом и белками.
34.05.17
Методы биологических исследований
Нариман
Баттулин
Рашитович
"Кандидат биологических наук"
"Отсутствует"
"S-6486-2016"
"16645065600"
"8457"
"http://assa.bionet.nsc.ru/open/person/65/"
"0000-0003-0611-0203"
РОССИЯ
Константин
Орищенко
Евгеньевич
"Кандидат биологических наук"
"Отсутствует"
"Q-6630-2016"
"34168182500"
"182198"
"https://www.researchgate.net/profile/Konstantin_Orishchenko"
"0000-0001-9718-9038"
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
Новосибирский государственный университет; НГУ
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет"
1025403658565
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения