Способ определения субстратной совместимости модифицированных трифосфатов дезоксиуридина и ДНК-полимераз сочетанием методов колличественной ПЦР и электрофореза
SELEX, АПТАМЕР, ПЦР, ДНК-ПОЛИМЕРАЗЫ, НУКЛЕОЗИДТРИФОСФАТЫ
Совместимость модифицированных нуклеозидтрифосфатов и ДНК-полимераз определяется сочетанием следующих методов: количественной ПЦР в режиме реального времени на матрице ДНК, составленной из двух синтетических олигонуклеотидов с вырожденной центральной частью с взаимно комплементарными фланкирующими частями при полной замене природного нуклеотида на модифицированный аналог; количественной ПЦР в режиме реального времени на бактериальной ДНК-матрице представляющей собой ПЦР-продукт фрагмента гена rpoB длиной 215 п.н. с амплификацией "вложенного" короткого внутреннего фрагмента длиной 126 п.н. при полной замене природного нуклеотида на модифицированный аналог; электрофоретического контроля продуктов ПЦР с количественной оценкой полноразмерного продукта. Модификации нуклеозидтрифосфатов представлены линейными и разветвленными алифатическими, фенилалкильными, алкилиндольными группами. Использовали ДНК-полимеразы без корректирующей 3"-5"-экзонуклеазной активностью (Taq, Vent(exo-)).
Изобретение относится к области молекулярной биологии, органической химии, биотехнологии, микробиологии и медицины. Наиболее перспективными областями применения изобретения является использование совместимых производных трифосфатов дезоксиуридина и ДНК-полимераз при получении модифицированных аптамеров, которые по назначению могут применяться для анализа белковых, пептидных и низкомолекулярных биологически-активных молекулярных мишеней, в том числе в датчиках и сенсорных устройствах, а также в качестве терапевтических средств. Модифицированные аптамеры, в отличие от антител, устойчивы к протеазам, что открывает новые возможности их применения, недостижимые для антител.
Чудинов А.В.
Эксперт по научным вопросам
Ипатова О. М.
Генеральный директор
34.15.15
Пространственная структура и свойства биополимеров
34.15.05
Методы и аппаратура в молекулярной биологии
31.23.29
Нуклеиновые кислоты и их компоненты
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Вадим
Василисков
Александрович
проведение электрофоретического контроля
Александр
Заседателев
Сергеевич
разработка концепции заявляемого способа
Сергей
Лапа
Анатольевич
конструирование праймеров, проведение ферментативных реакции
Сергей
Радько
Павлович
получение модифицированных одноцепочечных фрагментов ДНК в ходе реакции удлинения праймера
Виктория
Кузнецова
Евгеньевна
синтез модифицированных дезоксиуридинтрифосфатов
Валерий
Шершов
Евгеньевич
хроматографическая очистка модифицированных дезоксиуридинтрифосфатов
Ринат
Мифтахов
Азатович
проведение электрофоретического контроля
Александр
Чудинов
Васильевич
анализ литературных источников, синтез модифицированных дезоксиуридинтрифосфатов
Эдуард
Тимофеев
Николаевич
синтез модифицированных ДНК
Андрей
Лисица
Валерьевич
разработка концепции заявляемого способа, анализ литературных источников
Минобрнауки России
Министерство образования и науки Российской Федерации
1047796287440
Организация
Министерство образования и науки Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ООО "ИБМХ-ЭкоБиоФарм"
Общество с ограниченной ответственностью "ИБМХ-ЭкоБиоФарм"
1107746445894
МИХАИЛ
ИПАТОВ
АЛЕКСАНДРОВИЧ
Организация
Организации, учрежденные юридическими лицами или гражданами, или юридическими лицами и гражданами совместно
Общества с ограниченной ответственностью