Репортерная моноклональная клеточная линия НЕК-293/5-НТ4R, экспрессирующая мышиный рекомбинантный серотониновый рецептор типа 5НТ4
моноклональная клеточная линия рецептор серотонина клеточный биосенсор серотонина
Изобретение относится к области экспериментальной клеточной биологии и касается возможности наблюдения в реальном времени за локализацией серотонинового рецептора типа 5-НТ4. В основе изобретения – репортерные моноклональные модифицированные клетки НЕК293/5-НТ4R, гетерологически экспрессирующие на клеточной мембране мышиный рекомбинантный рецептор серотонина типа 5-НТ4, слитый с флуоресцентным зеленым белком GFP.
Изобретение основано на введении с помощью липофекции в исходные клетки полученного плазмидного вектора pAcGFP1-Hyg-N1/5-НТ4R, содержащего участок гена 5-НТ4 рецептора, соответствующий SEQ ID No. 3 Приложения и номерам нуклеотидов с 207 по 1376 последовательности NM_008313.4 базы данных NCBI, что обеспечивает экспрессию в полученных клетках серотонинового 5-НТ4 рецептора мыши, слитого с GFP, а так же фактора устойчивости к селективному антибиотику гигромицину. Многоэтапная селекция обеспечивает получение моноклональной клеточной линии, все клетки которой на высоком уровне стабильно экспрессируют функциональный мышиный серотониновый рецептор типа 5-НТ4, слитый с флуоресцентным зеленым белком GFP. Полученная линия адгезивна к культуральному пластику, характеризуется эпителиоподобной морфологией, временем удвоения около 30 часов, жизнеспособностью 80%, культивирование в стандартных условиях в присутствии гигромицина.
Полученная линия НЕК293/5-НТ4R может использоваться для неинвазивного оптического мониторинга изменения локализации мышиного серотонинового рецептора типа 5-НТ4, инициируемой серотонином и другими лигандами 5-НТ4-рецептора, в частности, для доклинического скрининга потенциальных лекарственных соединений.
Полина
Котова
Дмитриевна
в.н.с.
Кандидат биологических наук
Отсутствует
M-2567-2016
56002010900
РОССИЯ
Павел
Грабарник
Яковлевич
директор
РОССИЯ
34.05.17
Методы биологических исследований
01.06.DR
CELL BIOLOGY
Полина
Котова
Дмитриевна
РОССИЯ
Александр
Черкашин
Павлович
РОССИЯ
Ольга
Рогачевская
Анатольевна
РОССИЯ
Наталия
Кабанова
Владимировна
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФИЦ ПНЦБИ РАН
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ "ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР "ПУЩИНСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК"
1025007768983
ПАВЕЛ
ГРАБАРНИК
ЯКОВЛЕВИЧ
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения