Способ выявления токсигенных штаммов О1 Vibrio choleraе «постгаитянской» линии методом ПЦР в режиме реального времени
VIBRIO CHOLERAE ТОКСИГЕННЫЕ ШТАММЫ ПЦР ПРАЙМЕР
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и генетической инженерии. Сущность изобретения заключается в том, что в способе выявления токсигенных штаммов О1 Vibrio cholerae «постгаитянской» линии методом ПЦР в режиме реального времени проводят две реакции амплификации с помощью сконструированных двух пар праймеров: при этом в инкубационные смеси добавляют 0,5 мкл интеркалирующего красителя 5OX SYBR Green I. Учет результатов проводят по геометрическому методу путем регистрации Дельта Ср, отраженному на экране монитора,если разница между результатами амплификации первой пары праймеров Rtx01-Rtx02 и второй пары Rtx03-Rtx04 превышает 8 единиц циклов, то делают вывод, что клетка исследуемого штамма содержит ген rtx А4а с делецией 60 п.н., поэтому ее относят к штаммам «постгаитянской» линии токсигенных штаммов О1 Vibrio cholerae. В частном случае ПЦР проводят в объеме 25 мкл и реакционная смесь содержит: 2,5 мкл буфера, 1 Ед Taq ДНК-полимеразы, 0,2 мкМ смеси дНТФ, 0,5 мкл 50Х SYBR Green 1, 1,0 мкМ каждого из праймеров, 5 мкл ДНК - ДНК матрицы, оставшийся объем - вода. Кроме того, в частном случае ПЦР реакции проводят с соблюдением режимов: денатурация при 95°С - 2 мин (1 цикл); затем 30 циклов: денатурация при 95°С - 20 с, отжиг и учет по каналу FAM при 67°С - 20 с. Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике для быстрого определения эпидемического потенциала каждого свежевыделенного штамма, включающего в себя выявление полного спектра уникальных генетических маркеров, позволяющих установить происхождение конкретного возбудителя.
Изобретение может быть использовано в лабораторной диагностике для быстрого определения эпидемического потенциала каждого свежевыделенного штамма, включающего в себя выявление полного спектра уникальных генетических маркеров, позволяющих установить происхождение конкретного возбудителя.
Сергей
Водопьянов
Олегович
Главный научный сотрудник
Доктор медицинских наук
Отсутствует
-
6701686549
289536
https://orcid.org/0000-0003-4336-0439
0000-0003-4336-0439
РОССИЯ
Алексей
Носков
Кимович
Директор
РОССИЯ
34.27.29
Биология возбудителей заболеваний человека и животных
34.27.21
Генетика и селекция микроорганизмов
01.06.QU
MICROBIOLOGY
Игорь
Олейников
Павлович
15 %
РОССИЯ
Елена
Монахова
Владимировна
15 %
РОССИЯ
Сергей
Водопьянов
Олегович
40 %
РОССИЯ
Алексей
Водопьянов
Сергеевич
30 %
РОССИЯ
Роспотребнадзор
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1047796261512
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные казенные учреждения
ФКУЗ Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора
Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
1026103278959
Организация
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Федеральные государственные бюджетные учреждения