Способ создания удвоенных гаплоидов капусты белокочанной (Brassica oleracea L.) в культуре изолированных микроспор
удвоенные гаплоиды капуста белокочанная (Brassica oleracea L.) культура изолированных микроспор
Известные способы получения удвоенных гаплоидов в культуре изолированных микроспор у капусты белокочанной (Plant Cell Tiss Organ Cult, 2012, 110, pp. 69–76, DOI: 10.1007/s11240-012-0131-z, Romanian Biotechnological Letters, 2013, 18, pp. 8677-8684, DOI -нет). Использование питательной среды на этапе выделения, очистки и индукции эмбриогенеза делает технологию более дорогой. 
Наиболее близкой по технической сущности к заявляемому решению является технология производства эмбриоидов Plant Cell Tiss Organ Cult, 2012, 110, pp. 69–76, DOI: 10.1007/s11240-012-0131-z. Выделение микроспор из пыльников проводят в охлажденной до 4 °C питательной среде B5 (Gamborg et al., 1968) с добавлением 130 г/л сахарозы, рН 5,8. После этого микроспоры очищают фильтрованием через двухслойный нейлоновый фильтр с диаметром пор 45 мкм, и троекратным центрифугированием суспензии микроспор при 4 °C, 1000 оборотов/мин. в течение трех минут, заменяя питательную среду на свежую после каждого цикла. После последнего цикла центрифугирования микроспоры ресуспендируют в 2 мл охлажденной до 4 °C среды NLN-13 (Lichter, 1982) с добавлением 130 г/л сахарозы, рН 5,8. Плотность микроспор определяют в камере Фукса-Розенталя и средой NLN-13 с добавлением 130 г/л сахарозы и рН 5,8 доводят плотность микроспор в суспензии до 4×104 микроспор/мл. Суспензию микроспор разливают в чашки Петри диаметром 60 мм по 3 мл. Чашки Петри с суспензией микроспор инкубируют в темноте в течение 72 ч. при 32±0,1 °C, или 24 ч. при 32±0,1 °C, затем температуру снижают до 25±1 °C и продолжают инкубировать в темноте до появления эмбриоидов. 
Использование питательной среды NLN-13 для выделения и очистки микроспор делает технологию производства удвоенных гаплоидов более трудоемкой и дорогостоящей, так как используется холодная фильтр-стерилизация питательной среды. Выделение и очистка микроспор с использованием питательной среды В5 с добавлением маннитола менее трудоемко и менее затратно, чем использование среды NLN-13, так как для ее стерилизации используется автоклавирование и не требуется использование дорогостоящих одноразовых стерильных фильтров и шприцов. В среднем выделение и очистка микроспор одного образца с использованием питательной среды B5 (Gamborg et al., 1968) обходится в 33-35 рублей, с использованием питательной среды NLN-13 – 37-40 руб., с использованием 13%-го раствора сахарозы – 13-15 руб., таким образом снижение себестоимости выделения, очистки микроспор и индукции эмбриогенеза может составить 60-65 %.
Для решения указанной проблемы и достижения заявленного результата в способе создания удвоенных гаплоидов капусты белокочанной выделение и очистку микроспор осуществляют в 13%-м растворе сахарозы, рН 5,8, индукцию эмбриогенеза осуществляют в условиях инициирующего стресса в темноте при температуре 32,5±0,1°C, инкубируя микроспоры в течение 48 часов в 13%-м растворе сахарозы, рН 5,8, после воздействия инициирующего стресса  питательную среду заменяют на питательную среду NLN-13, рН 5,8, затем определяют плотность микроспор, доводят ее до 4×104 микроспор/мл и инкубируют в темноте до образования эмбриоидов при 25±1 °C в климатической комнате.
сельскохозяйственная биотехнология
Сократ
Монахос
Григорьевич
зав. кафедрой
Доктор сельскохозяйственных наук
Доцент
I-7729-2017
56052882900
РОССИЯ
Владимир
Трухачев
Иванович
ректор
РОССИЯ
62.65.11
Биотехнология в растениеводстве
04.01.MU
HORTICULTURE
Анастасия
Вишнякова
Васильевна
соавтор
РОССИЯ
Сократ
Монахос
Григорьевич
соавтор
РОССИЯ
Григорий
Монахос
Федорович
соавтор
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБОУ ВО РГАУ-МСХА ИМЕНИ К.А. ТИМИРЯЗЕВА
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ - МСХА ИМЕНИ К.А. ТИМИРЯЗЕВА"
1037739630697
ВЛАДИМИР
ТРУХАЧЕВ
ИВАНОВИЧ
Организация
Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения