Способ защиты от контаминации реакционных смесей для ПЦР
Полимеразная цепная реакция контаминация ДНК-гликозилазы УДГ
Группа изобретений относится к области генетической инженерии, конкретно к биотехнологии. Проводят ПЦР с добавлением 2'-дезоксиуридин-5'-трифосфата, урацил ДНК-гликозилазы и ДНК-гликозилаз Fpg, Nei. Детекцию результатов проводят с помощью интеркалирующего красителя, TaqMan-зонда или с помощью гель-электрофореза, олигонуклеотидных праймеров и ДНК- или РНК-матрицы. Отсутствие контаминации продуктами предыдущих запусков ПЦР устанавливают по отсутствию амплификации в пробах ПЦР без матрицы. Снижение концентрации ДНК-матрицы с 2'-дезокситимидин-5'-монофосфатом устанавливают по увеличению значений Cq или по снижению интенсивности полос продуктов ПЦР на электрофореграммах в пробах, содержащих УДГ и ДНК-гликозилаз Fpg, Nei, по сравнению с пробами с УДГ без Fpg, Nei.
Технический результат: повышение эффективности защиты ПЦР от контаминации за счет внесения одноцепочечных разрывов во фрагменты ДНК, содержащие апиримидиновые сайты. При добавлении Fpg и Nei в реакционную смесь для ПЦР эффективность концентрация продуктов ПЦР с дУМФ понижается в 500-1000 раз по сравнению с контрольными пробами с УДГ без дополнительных ферментов.
медицина и биотехнология
Дмитрий
Жарков
Олегович
Зав.лабораторией
Доктор биологических наук
Член-корреспондент РАН
K-2158-2012
6701753351
130022
РОССИЯ
Владимир
Коваль
Васильевич
Исполняющий обязанности директора
РОССИЯ
34.15.65
Молекулярная патология. Молекулярная диагностика
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Игорь
Оскорбин
Петрович
РОССИЯ
Дмитрий
Жарков
Олегович
РОССИЯ
Антон
Ендуткин
Валентинович
РОССИЯ
Максим
Филипенко
Леонидович
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Петр
Мордовской
Григорьевич
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ИХБФМ СО РАН
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук
1025403659852
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения