Способ идентификации полиморфизмов Cys1079Gly и Cys1079Phe медь-транспортной АТФ-азы Вильсона
ИЭМ-559 из медь-транспортная АТФ-аза Вильсона полиморфизмы Cys1079Gly и Cys1079Phe идентификация полиморфизмов
Разработан способ идентификации полиморфизмов p.Сys1079Gly и p.Сys1079Phe медь-транспортной АТФазы человека. Способ заключается в генотипировании соответствующих однонуклеотидных полиморфизмов в 14 экзоне гена АТФазы человека АТР7В (миссенс мутации) c.3235T>G и c.3236G>T методом полимеразной цепной реакции и полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) с использованием прямого праймера 5'- ACAAGACTGGCACCATTACCCA-3' и обратного праймера 5'- ACGСCCAAGTCCACGTAACTCTGTA-3'. Замена в 3'-конце обратного праймера Т на G (подчеркнуто) необходима для формирования методом ПЦР-опосредованного сайт-направленного мутагенеза в ПЦР-продукте сайта узнавания для эндонуклеазы BstAU I. ПЦР-продукт подвергают гидролизу эндонуклеазой BstAU I, фракционируют в 2,8% агарозном геле и после окрашивания этидиум бромидом визуализируют в проходящем УФ-свете. Обнаружение в агарозном геле двух фрагментов ДНК размером 156 и 26 п.н. определяют как гомозиготный генотип дикого типа c.3235TТ c.3236GG, трех фрагментов размером 182, 156 и 26 п.н. – как гетерозиготный генотип c.3235TG c.3236GG или c.3235TТ c.3236GT, а одного фрагмента размером 182 п.н. – как гомозиготный мутантный генотип c.3235GG c.3236GG или c.3235ТТ c.3236TT.
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано в медицине при диагностике предрасположенности к болезни Паркинсона (БП) и болезни Вильсона (БВ) для выбора предиктивной терапии
Вадим
Васильев
Борисович
заведующий отделом
Доктор медицинских наук
Профессор
G-4297-2015
7005574463
80675
РОССИЯ
Александр
Дмитриев
Валентинович
директор
РОССИЯ
34.05.17
Методы биологических исследований
01.06.KM
GENETICS & HEREDITY
01.06.CQ
BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY
Людмила
Пучкова
Валентиновна
50%
РОССИЯ
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
1187746579690
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные казенные учреждения
ФГБНУ "ИЭМ"
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины"
1037828000198
Организация
Министерство науки и высшего образования Российской Федерации
Федеральные государственные бюджетные учреждения